Эпидемиология и Инфекционные Болезни » Противовирусная терапия при невропатии лицевого нерва, ассоциированной с вирусом простого герпеса 1-го типа

Обновлено: 02.10.2022

Противовирусная терапия при невропатии лицевого нерва, ассоциированной с вирусом простого герпеса 1-го типа

Руженцова Т.А., Хавкина Д.А., Чухляев П.В.

1 ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва, Россия; 2 Московский медицинский университет «РЕАВИЗ», Москва, Россия

В проведенных ранее исследованиях было показано значение вируса простого герпеса 1-го типа (ВПГ-1)
в развитии поражений нервной системы. Патология черепных нервов регистрируется у пациентов любого возраста, существенно нарушает трудоспособность и качество жизни. Наиболее распространена невропатия лицевого нерва (паралич Белла). При этом заболевании была выявлена высокая частота обнаружения маркеров ВПГ-1 и показана эффективность противовирусной терапии. Однако высокая распространенность герпетической инфекции в популяции, в том числе и среди здоровых лиц, не позволяет считать убедительными доказательства роли вируса в развитии паралича Белла. Представлен клинический пример развития паралича Белла у пациентки 27 лет на фоне обострения инфекции, вызванной ВПГ-1. Лечение противовоспалительными и нейротропными препаратами в сочетании со средствами для улучшения микроциркуляции, а также немедикаментозная терапия были неэффективны. После проведенного курса сохранялись субфебрильная температура тела, жалобы на асимметрию лица, головные боли, В анализе крови определялся лимфоцитоз и повышение титров антител IgM и IgG к ВПГ-1. Назначение ацикловира привело к купированию симптоматики.

Литература

1. Исаков В.А., ред. Герпесвирусные инфекции человека: руководство для врачей. СПб.: СпецЛит, 2013. 670 с.

2. Михайлова И.И., Орлова В.А., Минутко В.Л., Малышева И.Н., Елисеева Н.А., Холодняк А.Ю., Кретова Ж.Ю. Сопряженность психопатологической симптоматики и уровня сывороточных антител к вирусам группы герпеса при различных типах течения приступообразной шизофрении. Академический журнал Западной Сибири 2013; 6(49): 99–102.

4. Shirts B.H., Prasad K.M., Pogue-Geile M.F., Dickerson F, Yolken R.H., Nimgaonkar V.L. Antibodies to cytomegalovirus and Herpes Simplex Virus 1 associated with cognitive function in schizophrenia. Schizophrenia Research 2008; 106(2–3): 268–74. DOI:10.1016/j.schres.2008.07.017.

5. Свистушкин В.М., Славский А.Н. Невропатия лицевого нерва: современные подходы к диагностике и лечению. Русский медицинский журнал 2016; (4): 280–5.

6. Невропатия лицевого нерва. В кн.: Одинака М.М., ред. Частная неврология: учебное пособие. М.: МИА, 2009: 110–4.

7. Baringer J.R., Swoveland P. Recovery of herpes-simplex virus from human trigeminal ganglions. N. Engl. J. Med. 1973; 288: 648–50. DOI:10.1056/nejm197303292881303.

8. Grundfest-Broniatowski S., Broniatowski M., Davies C.R., Jacobs C.B., Tucker H.M., Nose Y. Fine control of reinnervated muscle. Dynamic rehabilitation of facial paralysis. ASAIO 1989; 35(3): 484–6. DOI:10.1097/00002480-198907000-00101.

9. Yanagihara N. Facial nerve paralysis and its viral etiology. Asian Med. J. 1998; 41(2): 72–6.

10. Furuta Y., Takasu T., Sato K.C., Fukuda S., Inuyama Y., Nagashima K. Latent herpes simplex virus type 1 in human geniculate ganglia. Acta Neuropathologica 1992; 84: 39–4. DOI:10.1007/bf00427213.

11. McCormick D.P. Herpes-simplex virus as cause of Bell’s palsy. Lancet 1972; 299(7757): 937–9. DOI:10.1016/s0140-6736(72)91499-7.

12. Sartoretti-Schefer S., Wichmann W., Valavanis A. Idiopathic, herpetic and HIV-associated facial nerve palsies: abnormal MR enhancement patterns. Am. J. Neuroradiol. 1994; 15: 479–85.

13. Johnson R.T., Griffin J.W. eds. Current therapy in Neurologic Disease. 5th ed. St. Louis: Mosby, 1997. 429 p.

14. Деконенко Е.П., Леонтьева И.Я., Мартыненко И.Н., Митрофанова И.В., Соколова М.В., Караванов А.С., Прыткова М.И., Соколова М.М., Идрисова Ж.Р. Невриты лицевого нерва и их связь с вирусами герпеса. Журнал неврологии и психиатрии 2000; (6): 58–9.

15. Adour K.K., Ruboyianes J.M., Von Doersten P.G., Quesenberry C.P., Byl F.M., Hitchcock T. Bell’s palsy treatment with acyclovir and prednisone compared with prednisone alone: a double-blind, randomized, controlled trial. Ann Otol. Rhin. Laryng. 1996; 105(5): 371–8. DOI:10.1177/000348949610500508.

Об авторах / Для корреспонденции

Вирус простого герпеса

Инфицирование вирусом простого герпеса (ВПГ), обычно называемого герпесом, широко распространено во всем мире. ВПГ первого типа (ВПГ-1) обычно передаются при оральном контакте, вызывая инфицирование внутри или вокруг рта (герпес ротовой полости), но может также вызывать и генитальный герпес. ВПГ-2 передается в основном при сексуальном контакте и вызывает генитальный герпес.

Как герпес ротовой полости, так и генитальный герпес в большинстве случаев протекают бессимптомно или остаются нераспознанными, но могут вызывать такие симптомы, как болезненные пузырьки или язвы в месте инфицирования как в легкой, так и в тяжелой форме. Инфекция присутствует в организме пожизненно, и ее симптомы могут возникать повторно спустя много лет. Существуют препараты, которые снижают тяжесть и частоту симптомов, но не излечивают инфекцию.

Рецидивирующие симптомы орального и генитального герпеса могут причинять значительный дискомфорт. Наличие генитального герпеса может также приводить к стигматизации и негативно сказываться на половой жизни. Тем не менее со временем большинство носителей и того, и другого вида герпеса адаптируются к жизни с инфекцией.

Масштабы проблемы

В 2016 г. (последний год, за который имеются оценки) ВПГ-1 (в виде герпеса ротовой полости или области гениталий) были инфицированы 3,7 миллиарда человек в возрасте до 50 лет, или 67% населения. В большинстве случаев заражение ВПГ-1 происходит в детском возрасте.

Численность людей с генитальным герпесом, вызванным ВПГ-2, по данным на 2016 г., оценивалась на уровне 491 миллиона человек в возрасте 15–49 лет (13% мирового населения). Женщины заражаются ВПГ-2 почти в два раза чаще, чем мужчины, поскольку инфекция легче передается половым путем от мужчины к женщине. Распространенность данной инфекции возрастает с возрастом, хотя наибольшее число новых случае инфицирования происходит среди подростков.

Признаки и симптомы

Герпес ротовой полости протекает, как правило, бессимптомно, но может сопровождаться появлением болезненных пузырьков или открытых поражений (язв) внутри или вокруг рта. Перед появлением поражений инфицированные лица часто ощущают покалывание, зуд или жжение в области рта. Такие симптомы могут периодически возвращаться, и частота их возникновения у разных людей различна.

Генитальный герпес может протекать бессимптомно или с легкими симптомами, которые остаются нераспознанными. В случае появления симптомов для генитального герпеса характерно формирование одного или более пузырьков или язв в области гениталий или анальной области. Кроме того, новая инфекция может проявляться в виде лихорадки, ломоты в теле и увеличения лимфатических узлов. После первоначального эпизода, который может быть тяжелым, симптомы могут появляться снова. Для генитального герпеса, вызванного ВПГ-1, не характерны частые рецидивы. В случае ВПГ-2 повторение симптомов происходит часто. Такие рецидивы, однако, нередко протекают легче, чем при первом эпизоде, и со временем имеют тенденцию к ослаблению.

Передача инфекции

ВПГ-1 передается в основном при контакте с вирусом, присутствующим в местах поражения, слюне и на поверхностях внутри или вокруг рта. Вследствие орально-генитального контакта ВПГ-1 может также попадать на область гениталий и вызывать генитальный герпес. Он может передаваться через поверхность ротовой полости или кожи, которая выглядит нормальной, однако риск передачи инфекции наиболее высок при наличии активных поражений. Уже инфицированные ВПГ-1 не могут заразиться им повторно, но, тем не менее, подвергаются риску заражения ВПГ-2.

ВПГ-2 передается в основном при половом акте в результате контакта с поверхностями половых органов или анальной области, кожей, пораженными местами или жидкостями человека, инфицированного этим вирусом. ВПГ-2 может передаваться даже через кожу, которая выглядит нормальной, и часто передается при отсутствии симптомов.

В редких случаях герпес (ВПГ-1 и ВПГ-2) может передаваться от матери ребенку при родах и приводить к неонатальному герпесу.

Возможные осложнения

ВПГ-2 и ВИЧ-инфекция

Наличие ВПГ-2 повышает риск инфицирования ВИЧ примерно в три раза. Кроме того, лица, инфицированные ВИЧ и ВПГ-2, чаще передают ВИЧ другим лицам. ВПГ-2 является одной из наиболее распространенных инфекций среди ВИЧ-инфицированных лиц.

Тяжелая форма болезни

У лиц с ослабленной иммунной системой, в том числе на поздних этапах ВИЧ-инфекции, герпес часто протекает с более тяжелым симптомами и более частыми рецидивами. К числу редко встречающихся осложнений ВПГ-2 относятся менингоэнцефалит (инфекция головного мозга) и диссеминированная инфекция. В редких случаях инфекция, вызванная ВПГ-1, может также приводить к более тяжелым осложнениям, таким как энцефалит (инфекция мозга) или кератит (глазная инфекция).

Неонатальный герпес

Развитие неонатального герпеса может происходить при контакте новорожденного с ВПГ во время родов. Неонатальный герпес развивается редко, по оценкам в 10 из 100 000 деторождений в мире. Тем не менее это тяжелое состояние может приводить к стойкой неврологической инвалидности или смерти. Наибольший риск неонатального герпеса возникает в том случае, когда женщина впервые инфицируется ВПГ на поздних сроках беременности.

Лечение

Наиболее эффективными лекарственными средствами для лиц, инфицированных ВПГ, являются такие противовирусные препараты, как ацикловир, фамцикловир и валацикловир (см. рекомендации ВОЗ). Они способствуют снижению тяжести и частоты симптомов, но не приводят к излечению инфекции.

Профилактика.

Лицам с активно проявляющимися симптомами герпеса ротовой полости следует избегать оральных контактов с другими людьми (включая оральный секс) и совместного пользования предметами, контактировавшими со слюной. Лицам с симптомами генитального герпеса следует воздерживаться от половой жизни в период наличия симптомов. Как ВПГ-1, так и ВПГ-2 наиболее контагиозен в период наличия поражений, но может также передаваться и в тех случаях, когда никакие симптомы не ощущаются и не наблюдаются.

Наиболее эффективным способом профилактики генитального герпеса и других ИППП у лиц, ведущих половую жизнь, является систематическое и правильное использование презервативов. При этом, однако, не исключено инфицирование ВПГ при контакте с не защищенными презервативом участками гениталий и анальной области. Мужское медицинское обрезание может обеспечить мужчинам пожизненную частичную защиту от ВПГ-2, а также ВИЧ и вируса папилломы человека (ВПЧ).

Лицам с симптомами, позволяющими предполагать наличие генитального герпеса, следует предлагать тестирование на ВИЧ-инфекцию.

Беременные женщины с симптомами генитального герпеса должны информировать об этом медицинских работников. Профилактика инфицирования ВПГ-2 особенна важна для женщин на поздних сроках беременности, поскольку в этот период существует наиболее высокий риск развития неонатального герпеса.

Деятельность ВОЗ

ВОЗ принимает меры для повышения осведомленности о ВПГ-инфекции и ее симптомах, расширения доступа к противовирусным препаратам и содействия усилиям по профилактике ВИЧ среди лиц с генитальным герпесом, в частности путем проведения доконтактной профилактики.

ВОЗ и партнеры также содействуют проведению исследований, направленных на разработку новых средств профилактики ВПГ и борьбы с ним, таких как вакцины и бактерицидные средства.

Вирус простого герпеса эпидемиология


Герпетическая инфекция – инфекция, вызываемая герпесвирусами 1-го и 2-го типа – хроническое рецидивирующее заболевание, входящее в группу ТОRСН – инфекций, для которого характерно поражение кожи, слизистых, глаз, нервной системы.

Инфекция, вызванная герпесвирусами, распространена повсеместно. Инфицированность населения очень высокая. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) герпесвирусная инфекция занимает второе место среди вирусных заболеваний человека, уступая лишь гриппу.

Восприимчивость к инфекции всеобщая, независимо от пола и возраста.

Подъемы заболевания регистрируются в осенне-зимний период.

Проведенные за последние 10 лет эпидемиологические исследования показали, что к 15-летнему возрасту инфицировано 80% детей, а к 30 годам 90% населения имеют антитела к вирусам того или иного типа.

Возбудитель инфекции – вирус простого герпеса 1 или 2 типа (ВПГ 1 или ВПГ 2). Попадая в клетку – вирус вызывает ее гибель. В отдельных клетках вирус может сохраняться длительное время, но при последующей активации вируса, клетка погибнет.

Считается, что ВПГ – 1 чаще поражает дыхательные пути, а ВПГ-2 - урогенитальную систему, но, несмотря на это, роль ВПГ-1 в развитии генитального герпеса увеличивается.

Вирусы простого герпеса неустойчивы к действию физических и химических факторов, легко разрушаются под действием ультрафиолетовых и рентгеновских лучей, чувствительны к этиловому спирту, эфиру. При низких температурах (-20-70 о С) вирус сохраняется десятилетиями.

Источники инфекции – вирусоносители и больные с различными формами болезни.

Пути передачи инфекции:

  • Половой (наиболее значимый);
  • Гематогенный;
  • Воздушно-капельный;
  • Контактно-бытовой (через игрушки, предметы обихода, одежду).

Факторами передачи вируса являются: слюна, кровь, слезная жидкость, сперма, секрет влагалища и цервикального канала, различные органы и ткани, используемые при трансплантации, моча, медицинский инструментарий.

Попадает вирус в организм через поврежденные участки кожи и слизистой, затем, в месте внедрения вируса происходит размножение вирусных частиц. Первичное инфицирование вызывает латентную (скрытую, вялотекущую) инфекцию.

Клиническая картина.

Клинические проявления герпетической инфекции отличаются значительным разнообразием. Они зависят от локализации поражения, распространенности, состояния иммунной системы, типа вируса, а также от механизма заражения.

По механизму заражения герпетическая инфекция бывает первичная и рецидивирующая.

Первичная форма – остро возникающее заболевание при первом контакте с вирусом простого герпеса.

По локализации поражения:

  • Кожа – простой герпес, герпетиформная экзема;
  • Слизистые оболочки ротоглотки – стоматит, фарингит, тонзиллит;
  • Верхние дыхательные пути – острое респираторное заболевание;
  • Глаза – кератоконъюнктивит;
  • Урогенитальный тракт – уретрит, цистит, вульвовагинит;
  • Нервная система – менингит, энцефалит, менингоэнцефалит;
  • Внутренние органы – гепатит, гломерулонефрит, пневмония.

Генитальный герпес развивается у молодых людей после начала половой жизни. Первичный генитальный герпес отличается более тяжелым и продолжительным течением. Высыпания обильные и занимают большую площадь поражения. При первичном генитальном герпесе отмечается повышение температуры, общая слабость, раздражительность. В области гениталий появляются везикулезные высыпания, сохраняющиеся до 8 суток.

Влияние вируса простого герпеса на беременность и роды.

Первичное инфицирование и рецидивы во время беременности могут привести к мертворождению, выкидышам, а также к формированию пороков у плода. Наиболее опасно заражение в третьем триместре.

При первичном инфицировании матери во время беременности инфицирование плода происходит в 5% случаев. Чаще всего инфицирование ребенка происходит во время родов (85%) или после родов (10%).

Инфицирование ребенка ВПГ во время родов может стать причиной последующего развития герпетической инфекции новорожденного.

Основную опасность представляет выделение вируса со слизистой половых органов в момент родов. Выделение вируса может сопровождаться высыпаниями в области половых органов, а может и не сопровождаться никакими симптомами.

Последствия герпесвирусной инфекции для ребенка:

  • распространение вируса по всему организму с поражением головного мозга, легких, печени, надпочечников, кожи, глаз, ротовой полости;
  • поражение ЦНС (снижение аппетита, судороги, повышенная возбудимость);
  • поражение кожных покровов, слизистой оболочки глаз, рта.

Профилактика герпесвирусной инфекции:

Важным принципом профилактики этого заболевания является прекращение близких контактов с больным человеком в период обострения.

не пользоваться чужими предметами личной гигиены;

после контакта с пораженным герпесом участком (после нанесения противовирусного крема) необходимо тщательно вымыть руки;

Больной герпесвирусной инфекцией должен иметь отдельную посуду и пользоваться личным полотенцем;

Профилактика ВПГ-1 сводится к соблюдению общих правил предупреждения респираторных заболеваний. Профилактика ВПГ-2 соответствует профилактике инфекций передающихся половым путем ( использование презервативов во время половых контактов), использование антисептических растворов после полового акта.

Герпес-вирусные инфекции

Герпес-вирусные инфекции — группа широко распространенных антропонозных инфекционных болезней, вызываемых вирусами семейства Herpesviridae. Герпес-вирусы — семейство крупных ДНК-вирусов — подразделяют на три подсемейства в зависимости от типа клеток, в которых протекает инфекционный процесс, характера репродукции вируса, структуры генома, молекулярно-биологических и иммунологических особенностей: альфа (ВПГ-1, ВПГ-2, ВЗВ), бета (ЦМВ, ВГЧ-6, ВГЧ-7), гамма (ВЭБ, ВГЧ-8). В настоящее время известно 8 патогенных для человека герпес- вирусов (Табл.).

Герпес-вирусы и ассоциированные заболевания

Тип герпес-вируса Основные ассоциированные заболевания
Вирус простого герпеса 1 типа, ВПГ-1 Herpes simplex type 1 Везикулезные или пустулезные высыпания на коже и слизистых (орофарингеальный лабиальный, генитальный герпес, герпес кожи), офтальмогерпес, энцефалит
Вирус простого герпеса 2 типа, ВПГ-2 Herpes simplex type 2 Везикулезные или пустулезные высыпания на коже и слизистых (неонатальный, генитальный, диссеминированный герпес), менингит
Вирус Варицелла-Зостер, ВЗВ Varicella zoster virus, Human herpes virus type 3 Ветряная оспа, опоясывающий герпес
Вирус Эпштейна–Барр, ВЭБ Epstein–Barr virus, Human herpes virus type 4 Инфекционный мононуклеоз, назофарингеальная карцинома, лимфома Беркитта, В-клеточная лимфома
Цитомегаловирус, ЦМВ Cytomegalovirus, Human herpes virus type 5 Пре- и перинатальная инфекция; поражения различных органов и систем (легкие, слюнные железы, центральная и периферическая нервная система, глаза, печень, сердце, урогенитальный тракт); генерализованные формы
Вирус герпеса человека 6 типа, ВГЧ-6 Human herpes virus type 6 Внезапная экзантема (эритема новорожденных), лихорадка новорожденных с судорожным синдромом, мононуклеозоподобный синдром; у иммунокомпрометированных лиц – лихорадка, пневмония, гепатит, поражение ЦНС
Вирус герпеса человека 7 типа, ВГЧ-7 Human herpes virus type 7 Внезапная экзантема (эритема новорожденных), синдром хронической усталости
Вирус герпеса человека 8 типа, ВГЧ-8 Human herpes virus type 8 Саркома Капоши

Герпес-вирусная инфекция характеризуются хроническим рецидивирующим течением и пожизненным персистированием возбудителя в организме, широким распространением среди населения. Инфицированность ВПГ-1 достигает в европейских странах 50–80%, ВПГ-2 — 10–25%. Вирусом Эпштейна–Барр инфицировано до 50% молодых людей (до 18 лет) в развитых странах. В США антитела к ВЭБ в крови обнаруживают у 95% лиц, достигших 35-летнего возраста. Частота выделения ВГЧ-7 у детей в возрасте старше 36 мес — 100%.

Источник герпес-вирусов — больные острыми формами болезней (стоматит, генитальный герпес, ветряная оспа) и здоровые инфицированные лица, которые периодически выделяют возбудитель в окружающую среду со слюной, назофарингеальным секретом, секретом слизистых оболочек половых органов. В большинстве случаев первичное или повторное заражение происходит контактно-бытовым или половым путями, возможны вертикальный, парентеральный пути передачи.

В большинстве случаев герпетические инфекции протекают асимптомно, а клинически выраженное заболевание носит доброкачественный характер. В то же время, герпес-вирусы могут быть причиной тяжелой клинической патологии, в ряде случаев приводящей к летальному исходу, особенно у лиц с выраженными нарушениями иммунитета. Наибольшую угрозу для здоровья представляют герпетические нейроинфекции (летальность достигает 20%, частота инвалидизации — 50%), офтальмогерпес (развитие катаракты или глаукомы почти в 50% случаев); генитальный герпес (существенное нарушение качества жизни). Доказана роль ряда герпес-вирусов (ВЭБ, ВГЧ-8) в развитии злокачественных новообразований (лимфома Беркитта, В-клеточная лимфома, саркома Капоши и др.) или предполагается в развитии аденокарциномы кишечника, простаты и др. (ВПГ-2, ЦМВ).

Герпес-вирусы занимают важное место в группе возбудителей TоRCH-инфекций. К наиболее значимым герпес-вирусным инфекциям, представляющим серьезную угрозу для репродуктивного здоровья населения, относят герпетическую инфекцию (возбудитель ВПГ-1 и ВПГ-2) и цитомегаловирусную инфекцию (возбудитель ЦМВ), сведения о влиянии ВЭБ и ВЗВ на течение беременности или развитие внутриутробной патологии противоречивы.

Всем герпетическим инфекциям свойственно рецидивирующее течение. Частота рецидивов связана со снижением иммунных сил организма, что зависит от многих провоцирующих факторов (стресс, эндокринные нарушения, беременность, изменение географической зоны проживания, гиперинсоляция, употребление алкоголя, снижение иммунитета на фоне ВИЧ-инфекции, приема иммунодепрессантов и пр.).

Значительна зараженность герпес-вирусами больных ВИЧ-инфекцией. В США АТ к ВПГ-2 обнаруживают у 70% ВИЧ-инфицированных; АТ либо к ВПГ-1, либо к ВПГ-2 — у 95% больных. Герпетические поражения половых органов, в том числе бессимптомные, повышают риск передачи и заражения ВИЧ на 50%, согласно другим исследованиям – почти в 6 раз. Рецидив или реактивация ВПГ-2 может стимулировать репликацию ВИЧ, повышая количество ВИЧ в крови в 3–4 раза. ВИЧ-инфекция также оказывает неблагоприятное действие на течение герпетических заболеваний. Выделение ВПГ-2 у зараженных ВИЧ лиц по сравнению с неинфицированными в 4 раза выше и значительно возрастает по мере углубления иммуносупрессии. Опоясывающий герпес, особенно при рецидивирующем характере течения, выступает сигналом иммунологического неблагополучия. У ВИЧ-инфицированных лиц отмечено более частое выделение ВЭБ, возбудитель может присутствовать в орофарингеальных смывах у всех больных на стадии СПИДа. Вирус герпеса человека 8 типа ассоциирован с саркомой Капоши, которая является одним из оппортунистических заболеваний и чаще регистрируется у больных СПИДом.

Для диагностики герпес-вирусной инфекции может быть использован весь арсенал методов лабораторной диагностики: визуальное выявление при использовании световой микроскопии, выделение вируса на чувствительных клеточных культурах, определение АГ с использованием различных методов иммунохимии, выявление ДНК вирусов молекулярно-биологическими методами (преимущественно ПЦР), определение специфических АТ. Многие исследователи подчеркивают важную роль одновременного использования нескольких методов диагностики.

При интерпретации результатов следует учитывать, что факт инфицированности герпес-вирусами не свидетельствует об активности инфекционного процесса, поскольку для данной группы характерно существование в латентной форме. Необходимо помнить, что АТ к большинству герпес-вирусов выявляются более чем у 90% людей старше 25 лет, не имевших на момент обследования клиники каких-либо герпетических заболеваний, а обнаружение в крови ДНК герпес-вируса не всегда означает дальнейшее развитие клинически манифестной инфекции или является причиной имеющейся патологии.

Активность препаратов, содержащих эхинохром А, в отношении вируса простого герпеса 2-го типа in vitro и in vivo

Целью работы было изучение активности эхинохрома А – нафтохиноидного пигмента из морских ежей и его композиции с антиоксидантами в отношении вируса простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2) in vitro и in vivo.

Материалы и методы. Штамм ВПГ-2 (G ATCC VR-734) выращивали на культуре клеток Vero. Цитотоксическую и анти-ВПГ-2 активность препаратов оценивали in vitro по жизнеспособности клеток и подавлению цитопатогенного действия вируса с помощью МТТ-анализа. Эффективность препаратов у мышей с генитальным герпесом оценивали, учитывая изменения их массы тела, средней продолжительности жизни и показателей вирусной нагрузки.

Результаты и обсуждение. Композиция антиоксидантов: эхинохрома А, аскорбиновой кислоты и α-токоферола (5 : 5 :1) – демонстрировала более высокую противовирусную активность, чем один эхинохром А. Пероральное введение мышам композиции антиоксидантов предотвращало гибель 90% инфицированных ВПГ-2 животных и достоверно снижало вагинальную вирусную нагрузку. Противовирусная активность эхинохрома А и композиции антиоксидантов, вероятно, обусловлена как вирусингибирующей активностью препаратов, так и их антиоксидантными свойствами.

Заключение. Результаты исследования позволяют рассматривать эхинохром А и композицию антиоксидантов на его основе как перспективные лекарственные средства, обладающие противовирусными свойствами.

Ключевые слова

Введение

По данным Всемирной организации здравоохранения, ежедневно в мире более 1 млн человек заражаются возбудителями заболеваний, передаваемых половым путём [1]. Наибольшую опасность представляют 8 патогенных агентов, четыре из которых имеют вирусную природу. Это вирусы гепатита В, иммунодефицита человека, папилломы человека, а также вирус простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2) [2], вызывающий у людей генитальный герпес.

До настоящего времени единственным клинически одобренным антигерпетическим средством, применяемым для лечения ВПГ-2-инфекции, являются ацикловир и его аналоги, подавляющие репликацию вирусной ДНК [3, 4]. Однако использование этих препаратов не избавляет пациентов от рецидивов заболевания. Кроме того, в результате их длительного приёма не исключена опасность появления штаммов вируса, устойчивых к лекарственной терапии. Данные обстоятельства актуализируют поиск новых лекарственных средств, включая вещества природного происхождения, обладающие потенциально широким спектром противовирусного, в том числе антигерпетического, действия.

Хорошо известный природный антиоксидант эхинохром А (нафтохиноидный пигмент, получаемый из морских ежей) является действующим веществом отечественного препарата Гистохром®, который используется в кардиологии для лечения ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда, а также в офтальмологии при дегенеративных заболеваниях сетчатки и роговицы глаза [5, 6]. Способность эхинохрома А преодолевать гематоэнцефалический барьер [7] стала одной из предпосылок для изучения его противовирусных свойств.

Цель настоящего исследования изучение противовирусного (анти-ВПГ-2) действия эхинохрома А и его композиции с антиоксидантами in vitro и in vivo.

Материалы и методы

Вирус и культура клеток. В работе был использован штамм G вируса простого герпеса 2-го типа (ATCC VR-734). Вирус пассировали и титровали в культуре клеток Vero и в дальнейшем хранили при -80 °C. Клетки Vero (эпителиальные клетки почек африканской зелёной мартышки) культивировали с использованием среды DMEM (ООО «БиолоТ», Санкт-Петербург, Россия) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ООО «БиолоТ», Санкт-Петербург, Россия), 100 Ед/мл гентамицина и глутамина.

Животные. В опытах использовали самок белых аутбредных мышей массой тела 16-20 г, полученных из питомника НЦБТ РАН «Андреевка». Все процедуры выполняли строго в соответствии с требованиями Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей, от 18 марта 1986 г.

Препараты. В работе были использованы:

Приготовление стоковых растворов препаратов. Инъекционные формы препаратов (Гистохром® и Ацикловир®) для исследований in vitro и in vivo разводили до необходимых концентраций средой DMEM. Композицию антиоксидантов для опытов in vitro растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО, Sigma, США) и хранили при -20 °С, стоковый раствор (10 мг/кг) готовили путём разведения средой DMEM до конечной концентрации ДМСО 0,5%. Для перорального применения препаратов композицию антиоксидантов и таблетированную форму ацикловира суспендировали и разводили средой DMEM до необходимых концентраций.

Определение цитотоксической активности препаратов. Цитотоксичность препаратов оценивали на клетках Vero с помощью МТТ (метилтиазолилтетразолий бромид) теста [8]. Монослой клеток (1 χ 10 4 клеток/лунку), выращенных в 96-луночных планшетах (Nunclon Delta, ООО «Росмедбио», Санкт-Петербург, Россия), обрабатывали препаратами в концентрациях от 0 до 2000 мкг/мл и культивировали при 37 °С в атмосфере 5% CO2 в течение 3 сут в среде DMEM; необработанные клетки использовали в качестве контроля. К клеткам добавляли раствор МТТ в концентрации 5 мг/мл (Sigma, США) и инкубировали при 37 °С в течение 2 ч. Затем супернатант удаляли и добавляли 150 мкл/лунку изопропанола. Оптическую плотность (ОП) измеряли на спектрофотометре Varioscan Flash (Thermo Scientific, США) при длине волны 540 нм. Жизнеспособность клеток рассчитывали, как (ОПо) / (ОПк) · 100%, где ОПо и ОПк соответствуют оптической плотности обработанных препаратами и контрольных клеток соответственно. 50% цитотоксическую концентрацию препарата, снижающую жизнеспособность обработанных клеток на 50% по сравнению с контролем, рассчитывали с помощью регрессионного анализа дозозависимых кривых [9].

Противовирусная активность препаратов in vitro. Противовирусную активность препаратов оценивали, учитывая подавление цитопатического действия (ЦПД) ВПГ-2 и с помощью МТТ-теста. Культуру клеток Vero, выращенных в 96-луночных планшетах, инфицировали вирусом в дозе 100 ТЦИД50/мл (тканевая цитопатическая инфекционная доза) и одновременно обрабатывали препаратами в концентрациях от 0 до 50 мкг/мл в течение 60 мин при 37 °C. Затем супернатант удаляли, клетки отмывали, добавляли поддерживающую среду с 1% фетальной телячьей сыворотки и инкубировали при 37 °С в атмосфере 5% СО2 в течение 3 сут. ЦПД вируса (%) рассчитывали по формуле:

(ОПtv ОПcv) / (ОПcd ОПcv) ∙ 100%,

где ОПtv соответствует оптической плотности инфицированных клеток, обработанных соответствующим препаратом; ОПст оптической плотности необработанных препаратом инфицированных клеток, ОПcd оптической плотности контрольных (необработанных и неинфицированных) клеток. 50% ингибирующую концентрацию препарата (IC50), снижающую на 50% вирус-индуцированное ЦПД, рассчитывали с помощью регрессионного анализа дозозависимых кривых [9]. Селективный индекс препарата (SI) вычисляли как отношение 50% цитотоксической концентрации (CC50) к IC50.

При изучении влияния препаратов на разные стадии репродукции вируса в культуре клеток гистохром и композицию антиоксидантов использовали в концентрации 20 мкг/мл, ацикловир 10 мкг/мл при инфицирующей дозе вируса 100 ТЦИД50/мл. Для определения профилактической активности препаратов монослой клеток обрабатывали препаратом в течение 2 ч при 37 °С, затем инфицировали вирусом в течение 1 ч при 37 °С, отмывали и инкубировали в течение 3 сут при 37 °С в 5% атмосфере CO2. При исследовании вирулицидной активности вируссодержащую жидкость смешивали с препаратом в соотношении 1:1, инкубировали в течение 1 ч при 37 °С, затем наносили на монослой клеток и инкубировали в течение 3 сут при 37 °С в атмосфере 5% СО Для определения вирусингибирующей активности препаратов монослой клеток инфицировали вирусом в течение 1 ч при 37 °С, затем к клеткам добавляли тестируемый препарат и в течение 3 сут инкубировали при 37 °С в 5% атмосфере CO2. Противовирусную активность препаратов оценивали по подавлению ЦПД вируса (%), как было показано выше.

Экспериментальная герпетическая инфекция у мышей. Генитальный герпес у мышей моделировали путём введения во влагалище животных по 30 мкл ВПГ-2 (10 5 ТЦИД50/мл). Интактным мышам (в качестве отрицательного контроля) вводили эквивалентное количество физраствора. Методом случайной выборки все животные были разделены на 8 групп (по 10 мышей в группе): контроль (-) группа интактных животных; контроль (+) группа инфицированных животных, не получавших лечения; мыши, получавшие гистохром по 1 мг/кг или 2 мг/кг; мыши, которым вводили композицию антиоксидантов по 2 мг/кг или 4 мг/кг; животные, получавшие по 50 мг/кг ацикловира. Ранее [10] было показано, что гистохром в указанных дозах нетоксичен для мышей. Эффективность применения ацикловира в дозе 50 мг/кг при инфекциях, вызываемых заражением мышей вирусом простого герпеса 1-го и 2-го типа, продемонстрировали в своих работах E.R. Kern и соавт. (1982) [11] и M.N. Prichard и соавт. (2011) [12]. Препараты использовали следующим образом: гистохром, как инъекционное средство, вводили внутрибрюшинно, композицию антиоксидантов внутрижелудочно (аналог пероральному способу введения в клинике). Препарат сравнения ацикловир вводили как внутрибрюшинно, так и внутрижелудочно. Все препараты вводили в объёме 0,2 мл 1 раз в день в течение 5 дней. Срок наблюдения за животными составлял 21 день. Эффективность лечения оценивали по количеству выживших животных (%), средней продолжительности жизни, изменению массы тела, их общему состоянию и инфекционному титру вируса.

Для определения титра вируса у животных каждой группы брали вагинальные смывы на 5-й и 7-й дни после заражения. С этой целью мышам во влагалище вводили 30 мкл охлаждённой среды DMEM, собранные смывы доводили до объёма 150 мкл средой DMEM, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин для осаждения клеток и слизи. Десятикратные разведения супернатантов наносили на монослой клеток Vero в 96-луночных планшетах, инкубировали в течение 3 дней при 37 °C, в атмосфере 5% CO2. Титр вируса определяли, используя метод Рида и Менча (1938) [13] и выражали в lg ТЦИД50/мл.

Статистический анализ проводили с использованием пакета программ Statistica 10.0. Результаты представлены как среднее ± стандартное отклонение. Различия между показателями в контрольной и опытной группах выявляли с использованием критерия Вилкоксона для связанных выборок. Они считались достоверными приp < 0,05.

Результаты

Снижение вызываемого ВПГ-2 цитопатогенного эффекта в культуре клеток Vero под действием препаратов. Перед оценкой противовирусной активности препаратов была исследована их цитотоксическая активность в отношении клеток Vero в диапазоне концентраций от 0 до 2000 мкг/мл. Ацикловир использовали в качестве контроля, как стандартный противовирусный препарат. На основании результатов МТТ-анализа были определены CC50 всех исследуемых препаратов. Дальнейшее изучение противовирусной активности проводили при концентрациях препаратов менее 50 мкг/мл. которые обеспечивали жизнеспособность клеток на уровне >70%.

Вначале противовирусное действие тестируемых соединений исследовали путём обработки клеток Vero препаратами и различных концентрациях (от 0 до 50 мкг/мл) и одновременно вирусом (100 ТЦИД50/мл). В результате была показана умеренная противовирусная активность тестируемых препаратов, которые дозозависимо подавляли опосредуемое вирусами ЦПД. IC50 препаратов и их SI, характеризующие противовирусную активность, представлены в табл. 1. Установлено, что композиция антиоксидантов защищала клетки Vero от вирусной инфекции при существенно более низких IC и более высоких показателях SI, чем один гистохром (p < 0,05).

Цитотоксическая и противовирусная (анти-ВПГ-2) активность препаратов в культуре клеток Vero

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Читайте также: