Эритрит агар

Обновлено: 02.10.2022

1.1.Набор реагентов предназначен для выделения бруцелл из инфицированного материала (кровь, моча, мокрота и др.) и культивирования штаммов бруцеллезного микроба.

1.2.Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г

Выделение бруцелл из инфицированного материала и культивирование штаммов бруцеллезного микроба осуществляется микробиологическим методом.

Принцип метода – визуальное обнаружение бруцелл, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.

Набор реагентов представляет собой смесь сухих компонентов из расчета г/л:

питательный агар сухой (СПА) 35,0

Набор реагентов должен обеспечивать рост тест-штаммов Brucella abortus 19ВА и Brucella melitensis 16М при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого штамма из разведения 10 -6 и 10 -7 на всех засеянных чашках Петри через 72 ч инкубации при температуре (37±1)°С в виде бесцветных, прозрачных, круглых колонии диаметром 1,0-1,5 мм.

Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).

5.ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

  • Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С
  • Флаконы стеклянные
  • Пробирки стерильные
  • Чашки Петри
  • Вода дистиллированная
  • Спиртовка
  • 0,9 % раствор натрия хлорида

Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.

7.1.Приготовление рабочего раствора реагента

Набор реагентов в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения при перемешивании, кипятят 2-3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в стерильные флаконы, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют автоклавированием в течение 20 мин при температуре 121 °С. Готовую среду допускается хранить не более 14 сут при температуре от 2 до 8 °С. Перед использованием стерильную среду во флаконах растапливают до полного расплавления агара, охлаждают до температуры 45-50 °С, тщательно перемешивают, разливают в стерильные чашки Петри.

8.РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Посев исследуемого материала проводить в соответствии с «Методическими указаниями по профилактике и лабораторной диагностике бруцеллеза людей» М., 1980 г.

Срок годности – 2 года со дня изготовления. Набор реагентов с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Хранить набор реагентов необходимо при температуре от 2 до 25 ºС в герметично закрытой упаковке в сухом, защищенном от света месте.

Транспортирование должно проводиться при температуре от 2 до 25 ºС всеми видами крытого транспорта.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

Рекламации на качество набора реагентов в течение срока годности следует направлять в адрес производителя: ФГУП «НПО «Микроген», 115088, Москва, ул.1-я Дубровская, 15, тел.(495) 645-62-00. Адрес производства: 367010, г.Махачкала. ул.А.Султана 13 «б» тел 8722 55-82-32

Питательные среды для диагностики бруцеллеза

В обзоре приведены данные отечественной и зарубежной литературы о составе и практике применения питательных сред, используемых для диагностики бруцеллеза и производства иммунобиологических препаратов. рассмотрены питательные среды для культивирования, выделения, накопления, идентификации и дифференциации бруцелл и их L -форм, а также синтетические и транспортные среды. отмечены положительные и отрицательные стороны части препаратов. представлены сведения о белковых основах, стимуляторах роста, селективных композициях и других компонентах, входящих в состав сред для диагностики бруцеллеза. особое внимание уделено селективным средам, истории их развития и совершенствования. обозначены требования к ингибирующим свойствам данных препаратов, показаны недостатки применения некоторых антимикробных агентов. указаны питательные среды различного назначения, регламентированные для применения нормативно-методическими документами российской Федерации, рекомендациями воз и всемирной организацией по охране здоровья животных. приведена информация о принципах оценки качества питательных сред и тест-штаммах, используемых для контроля данных препаратов по ростовым и ингибирующим показателям. освещены тенденции разработки питательных сред для культивирования и выделения бруцелл, а также методов их применения. выявлена необходимость проведения исследований в области разработки новых питательных сред для выделения бруцелл из материала, контаминированного посторонними микроорганизмами.

Ключевые слова

Об авторах

Ковтун Юрий Сергеевич.

355035, Ставрополь, ул. Советская, 13-15.

Список литературы

1. Пономаренко Д.Г, Ежлова Е.Б., Русанова Д.В., Хачатурова А.А., Пакскина Н.Д., Бердникова Т.В., Манин Е.А., Семенко О.В., Логвиненко О.В., Ракитина Е.Л., Костюченко М.В., Малецкая О.В., Куличенко А.Н. Анализ эпизоотолого-эпидемиологической обстановки по бруцеллезу в Российской Федерации в 2018 г. и прогноз на 2019 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2019; 2:14-21. DOI: 10.21055/0370-1069-2019-2-14-21.

2. Онищенко Г.Г, Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. М.: ЗАО «Шико»; 2013. 560 с.

3. Corbel M.J. Food and Agriculture Organization of the United Nations, World Health Organization, World Organization for Animal Health. Brucellosis in humans and animals. Geneva; 2006. 89 p.

5. Whatmore A.M., Davison N., Cloeckaert A., Al Dahouk S., Zygmunt M.S., Brew S.D., Perrett L.L., Koylass M.S., Vergnaud G., Quance C., Scholz H.C., Dick E.J. Jr., Hubbard G., Schrnbritz-Loutsevitch N.E. Brucella papionis sp. nov., isolated from baboons (Papio spp.). Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2014; 64(Pt 12):4120-8. DOI: 10.1099/ijs.0.065482-0.

6. Scholz H.C., Revilla-Fernandez S., Al Dahouk S., Hammerl J.A., Zygmunt M.S., Cloeckaert A., Koylass M.S., Whatmore A.M., Blom J., Vergnaud G., Witte A., Aistleitner K., Hofer E. Brucella vulpis sp. nov., isolated from mandibular lymph nodes of red foxes (Vulpes vulpes). Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2016; 66(5):2090-8. DOI: 10.1099/ijsem.0.000998.

7. Казанев А.П., Буланьков Ю.И. Бруцеллез. В кн.: Лобзин Ю.В., Жданов К.В, редакторы. Руководство по инфекционным болезням. В 2 кн. Кн. 1. СПб: ООО «Издательство Фолиант»; 2011. С. 389-400.

8. Министерство здравоохранения Российской Федерации. Бруцеллез у взрослых. Клинические рекомендации. 2014. 71 с.

9. Таран И.Ф., Лямкин ГИ. Бруцеллез (микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика). Ставрополь; 1996. 172 с.

10. Joint FAO/WHO expert committee on brucellosis. World Health Organ. Tech. Rep. Ser. 1986; 740:1-132. PMID: 3097967.

11. The OXOID MANUAL. 9th Edition. 2006. 624 p.

13. Соболев В.В., Мельник Н.В., Скляров О.Д., Тройнин А.С., Зенов Н.И., Климанов А.И., Шумилов К.В., Литенкова И.Ю., Рахманин П.П., Крюков С.В., Тренев В.Н., Соловьев Б.В., Балашов В.Г. Способ получения бруцеллезного антигена из штамма Brucella abortus 19 для изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК, бруцеллезного антигена для розбенгал пробы (РБП) и бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки и диагностические наборы. Патент РФ № 2361610, опубл. 20.07.2009 г. Бюл. № 20.

14. Пяткова Н.В., Суслопаров А.А., Федотов А.К., Юдников В.А., Полищук В.И., Охапкина В.Ю., Дармов И.В. Способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов при глубинном вырашцвании с использованием жидкой питательной среды минимизированного состава. Патент РФ 2687373, опубл. 13.05.2019 г. Бюл. № 14.

15. Кабахова П.М., Хаиров С.Г., Юсупов О.Ю., Яникова Э.А. Сравнительное изучение разных питательных сред для промышленного культивирования бруцелла абортус 19. Ветеринарная медицина. 2014; 2:6-8.

16. Девришов Д.А., Шведов В.В., Шведов Д.В., Бедоева З.М. Сравнительная оценка ростовых свойств производственных культур бруцелл на различных питательных средах. Ветеринарная медицина. 2014; 1:19-34.

17. Ковтун Ю.С., Курилова А.А., Катунина Л.С, Василенко Е.И. Сравнительная оценка белковых гидролизатов при разработке на их основе питательной среды для культивирования бруцелл. Проблемы особо опасных инфекций. 2016; 4:93-7. DOI: 10.21055/0370-1069-2016-4-93-97.

18. Мамлеева Н.К., Торбина М.П., Белозерова Г.А. Питательная среда для диагностики бруцеллеза. Авторское свидетельство СССР № 1806186, опубл. 30.03.1993 г. Бюл. № 12.

19. Зайцева А.И. Изучение эффективности лечебной бруцеллезной вакцины, приготовленной на среде с дрожжевым автолизатом. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1961; 1:107-10.

20. Иванов М.М., Михайлов Н.А. Питательная среда для выращивания микроорганизмов. Авторское свидетельство СССР № 382682, опубл. 23.05.1973 г. Бюл. № 23.

21. Головнева С.И., Лямкин Г.И., Катунина Л.С., Ляпустина Л.В., Старцева О.Л., Малецкая О.В., Ефременко В.И. Питательная среда для культивирования бруцелл. Патент РФ № 2299238, опубл. 20.05.2007 г. Бюл. № 14.

22. Tripathi K.K., Bhatnagar L., Seiffge D Jankowski R.P., Aikins H.E., Gupta K.G. On the growth of Brucella species in presence of erythritol in defined and undefined media and amniotic fluid of human, cow and sheep. Zentralbl. Bakteriol. Orig. A. 1977; 237(2-3):324-9.

23. Karagul M.S. Evaluation of adding erythritol to Farrell medium for primary isolation of the Brucella melitensis strains. Kocatepe Vet. J. 2019; 12(1):75-81. DOI: 10.30607/kvj.494891.

24. Miranda K.L., Dorneles E.M.S., Poester F.P., Martins Filho P.S., Pauletti R.B., Lage A.P. Different resistance patterns of reference and field strains of Brucella abortus. Braz. J. Microbiol. 2015; 46(1):265-9. DOI: 10.1590/S1517-838246120130625.

25. Девришов Д.А., Кабардиев С.Ш., Юсупов О.Ю. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота. Патент РФ № 2642316, опубл. 24.01.2018 г.

27. Gerhardt P, Wilson J.B. The nutrition of brucellae: growth in simple chemically defined media. J. Bacteriol. 1948; 56(1):17-24. PMID: 16561542. PMCID: PMC518538.

28. Rode L.J., Oglesby G., Schuhardt VT. The cultivation of brucellae on chemically defined media. J. Bacteriol. 1950; 60(5):661-8.

29. Цыганкова Р.Е., Майский В.Г., Ляпустина Л.В., Лямкин ГИ. Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл. Патент РФ 2148638, опубл. 10.05.2000 г. ,

31. Меринов С.П., Широков В.А., Голубинский Е.П., Пинигин А.Ф., Петухова о.С. Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл. Авторское свидетельство СССР № 933702, опубл. 07.06.1982 г. Бюл. № 21.

32. Донской Д.Н., Пинигин А.Ф., Голубинский Е.П., Меринов С.П. Минимальная синтетическая питательная среда для Brucella. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1983; 11:112.

33. Алимов А.М., Зайнеев Н.Ш., Салмаков К.М., Хазипов Н.З. Синтетическая среда для определения сахаролитической активности бруцелл. Авторское свидетельство СССР 1210453, опубл. 23.03.1988 г. Бюл. № 11.

34. Marin C.M., Alabart J.L., Blasco J.M. Effect of antibiotics contained in two Brucella selective media on growth of Brucella abortus, B. melitensis, and B. ovis. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(2):426-8.

36. Huddleston I. Forrest, Hasley D.E., Torrey J.P. Further studies on the isolation and cultivation of Bacterium abortus (Bang). J. Infect. Dis. 1927; 40(20):352-68. DOI: 10.1093/infdis/40.2.352.

37. Henry B.S., Traum J., Haring C.M. Methods for the isolation of Brucella abortus. Hilgardia. 1932; 6(12):355-79. DOI: 10.3733/hilg.v06nk2p355.

38. Kuzdas C.D., Morse E.V A selective medium for the isola-tion of brucellae from contaminated materiales. J. Bacteriol. 1953; 66(4):502-4. PMID: 13096514. PMCID: PMC317420.

39. Jones L.M., Morgan W. J.B. A preliminary report on a selec-tive medium for the culture of Brucella, including fastidious types. Bull. World Health Organ. 1958; 19(19:200-3.

42. Stack J.A., Harrison M., Perrett L.L. Evaluation of a selective medium for Brucella isolation using natamycin. J. Appl Microbiol. 2002; 92(4):724-8. DOI: 10.1046/j.1365-2672.2002.01595.x.

45. Vicente A.F., Antunes J.MA.R, Lara G.H.B., Mioni M.S.R., Allendorf S.D., Peres M.G., Appolinario C.M., Listoni F. J.P., Ribeiro M.G., Megid J. Evaluation of three formulations of culture media for isolation of Brucella spp. regarding their ability to inhibit the growth of contaminating organisms. Biomed. Res. Int. 2014; 2014:702072. DOI: 10.1155/2014/702072.

46. World Organization for Animal Health. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals. 6th ed. OIE; 2008. P. 628.

47. Karagul M.S., Ikiz S. Comparison of the isolation and inhibition abilities of selective media used for Brucella spp. Isolation. Turk. J. Vet. Anim. Sci. 2017; 41:781-6. DOI: 10.3906/vet-1701-50.

48. Brodie J., Sinton G.P. Fluid and solid media for isolation of Brucella abortus. J. Hyg. (bond). 1975; 74(3):359-67. DOI: 10.1017/s0022172400046878.

49. Омарова С.М., Ахмедова Э.М., Меджидов Ш.М., Муртузалиева П.М. Питательная среда для выделения бруцелл. Патент РФ № 2266956, опубл. 27.12.2005 г. Бюл. № 36.

50. Грубер И/M., Мельникова B.A., Шостак O.A., Черкасова ЛС. Специфическая активность селективной питательной среды для выделения бактерий рода Haemophilus. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005; 3:15-7.

51. Васильев Д.А., Карпунина Л.В., Щербаков А.А., Назарова Л.С., Швиденко И.Г., Золотухин Сн. L-формы возбудителей зооантропонозов. Ульяновск: изд-во УГСХА им. П.А. Столыпина; 2013. 118 с.

52. Михайлов Л.М., Маевский М.П., Кузнецов В.И., Калиновский А.И., Татарникова О.Г. Питательная среда для выделения и культивирования L-форм бруцелл. Патент РФ № 2415918, опубл. 10.04.2011 г. Бюл. № 10.

53. Михайлов Л.М., Калиновский А.И., Баранникова Н.Л., Кузнецов В.И., Атлас А.Г., Андреевская Н.М., Михайлова В.А., Татарникова О.Г., Гордиенко Л.Н., Куликова Е.В., Балахонов С.В. Конструирование питательных сред для бруцелл в L-форме. Проблемы особо опасных инфекций. 2012; 3:89-93. DOI: 10.21055/0370-1069-2012-3-89-93.

54. Geresu M.A., Ameni G., Wubete A., Arenas-Gamboa A.M., Gezahegne M. K. Isolation and identification of Brucella species from dairy cattle by biochemical tests: The first report from Ethiopia. World Vet. J. 2016; 6(2):80-8. DOI: 10.5455/wvj.20160471.

RU2266956C2 - Питательная среда для выделения бруцелл - Google Patents

Publication number RU2266956C2 RU2266956C2 RU2003137241/13A RU2003137241A RU2266956C2 RU 2266956 C2 RU2266956 C2 RU 2266956C2 RU 2003137241/13 A RU2003137241/13 A RU 2003137241/13A RU 2003137241 A RU2003137241 A RU 2003137241A RU 2266956 C2 RU2266956 C2 RU 2266956C2 Authority RU Russia Prior art keywords broth medium glucose distilled water agar Prior art date 2003-12-23 Application number RU2003137241/13A Other languages English ( en ) Other versions RU2003137241A ( ru Inventor С.М. Омарова (RU) С.М. Омарова Э.М. Ахмедова (RU) Э.М. Ахмедова Ш.М. Меджидов (RU) Ш.М. Меджидов П.М. Муртузалиева (RU) П.М. Муртузалиева Original Assignee Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации" Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.) 2003-12-23 Filing date 2003-12-23 Publication date 2005-12-27 2003-12-23 Application filed by Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации" filed Critical Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации" 2003-12-23 Priority to RU2003137241/13A priority Critical patent/RU2266956C2/ru 2005-06-10 Publication of RU2003137241A publication Critical patent/RU2003137241A/ru 2005-12-27 Application granted granted Critical 2005-12-27 Publication of RU2266956C2 publication Critical patent/RU2266956C2/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клинической микробиологии, и может быть использовано для бактериологической диагностики бруцеллеза. Питательная среда содержит питательный бульон, пептон ферментативный, витаминный препарат "ЭКД", Д(+) глюкозу, натрия хлорид, метабисульфит натрия, налидиксовую кислоту, кристаллический фиолетовый, агар микробиологический, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды и удешевить ее стоимость. 1 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для бактериологической диагностики бруцеллеза.

Бруцеллез относится к зоонозным болезням, при которых основным источником заболевания у людей являются больные сельскохозяйственные животные.

Разнообразие клинических проявлений бруцеллеза нередко затрудняет правильную постановку диагноза и требует применения лабораторных методов исследования.

Особые затруднения в диагностике бруцеллеза представляют случаи с неясным анамнезом, с нехарактерной клиникой ранних и особенно поздних проявлений инфекции, рецидивах, заболевания у заразившихся вакцинированных и при нередко встречающихся латентных формах инфекции. Во всех этих случаях лабораторные методы исследования часто приобретают решающее значение (1).

Известны питательные среды для выделения бруцелл агар Мартена, агар Альбими, сывороточно-декстрозный агар, глюкозоглицериновый агар, Эритрит-агар (2, 3, 4).

Указанные среды (сывороточно-декстрозный агар, глюкозоглицериновый агар) не стандартны, трудоемки в применении, кроме того все эти вышеперечисленные среды неселективные и не позволяют выделить культуру бруцелл из инфицированного материала.

Наиболее близким решением задачи того же назначения по совокупности признаков и достигаемому эффекту является питательная среда для выделения бруцелл фирмы Merck (4), содержащая источник азотистого питания - пептон мясной и пептон казеиновый, стимулятор роста - дрожжевой экстракт, а так же Д (+) глюкозу, натрия хлорид, агар, в качестве ингибиторов сопутствующей микрофлоры - бацитрацин, полимиксин, циклогексамид, этиловый фиолетовый.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда обладает недостаточными ростовыми свойствами, кроме того, данная питательная среда импортного производства дорогостоящая.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит в качестве источника азотистого питания питательный бульон для культивирования микроорганизмов, в качестве стимуляторов роста - витаминный препарат "ЭКД" и метабисульфит натрия, в качестве ингибиторов сопутствующей микрофлоры - кристаллический фиолетовый и налидаксовую кислоту при следующем соотношении компонентов (5, 6, 7) в г/л дистилированной воды:

питательный бульон для
культивирования микроорганизмов - 14,0-16,0
пептон ферментативный - 9,0-11,0
витаминный препарат "ЭКД" - 4,0-6,0
Д(+) глюкоза - 0,5-1,5
натрия хлорид - 4,0-6,0
метабисульфит натрия - 0,05-0,15
кристаллический фиолетовый - 0,0005-0,0015
налидиксовая кислота - 0,015-0,025
агар микробиологический - 10,0-12,0

Введение в состав предлагаемой среды кристаллического фиолетового и налидиксовой кислоты ингибирует полностью рост сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры и не оказывает влияние на рост бруцелл. Кроме того питательная среда обладает хорошими ростовыми свойствами, отмечается рост колоний бруцелл на 3 сутки, и то время как на среде-прототипе - на 4-5 сутки. Среда сконструирована из отечественных, гостированных компонентов и не требует внесения ex temporae антибиотиков после стерилизации среды.

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 14,0 г питательного бульона для культивирования микроорганизмов, 9,0 г пептона ферментативного, 4,0 г витаминного препарата "ЭКД", 0,5 г Д(+) - глюкозы, 4,0 г натрия хлорида, 0,05 г метабисульфита натрия, 0,005 г кристаллического фиолетового, 10,0 г агара микробиологического.

Среду доводят до кипения и кипятят 2 минуты. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,015 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в питательную среду. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 112°С в течение 20 минут. Разливают в стерильные чашки Петри, предварительно остудив среду до 45°С. Чашки подсушивают в термостате при 37°С в течение (35±5) минут.

Пример 2. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 15,0 г питательного бульона для культивирования микроорганизмов, 10,0 г пептона ферментативного, 5,0 г витаминного препарата "ЭКД", 1,0 г Д(+) - глюкозы, 5,0 г натрия хлорида, 0,1 г метабисульфита натрия, 0,001 г кристаллического фиолетового, 11,0 г агара микробиологического.

Среду доводят до кипения и кипятят 2 минуты. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,02 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в питательную среду. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 16,0 г питательного бульона для культивирования микроорганизмов, 11,0 г пептона ферментативного, 6,0 г витаминного препарата "ЭКД", 1,5 г Д(+) - глюкозы, 6,0 г натрия хлорида, 0,15 г метабисульфита натрия, 0,0015 г кристаллического фиолетового, 12,0 г агара микробиологического.

Среду доводят до кипения и кипятят 2 минуты. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,025 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в питательную среду. Далее согласно примерам 1, 2. Контроль качества среды осуществляли путем посева тест-штаммов Brucella abortus ВА 19 из разведения 10 -6 и 10 -7 , Echerichia coli 168/59, Proteus vulgaris HX 19 N 222, Stafylococcus aureus 209-P из разведения 10 -3 . Через 72-120 часов инкубации посевов в термостате при 37°С определяют наличие роста.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда обладает более высокими ростовыми свойствами. На предлагаемой среде бруцеллы формируют типичные колонии на 3 сутки, в то время как на известной среде на 4-5 сутки.

Представленные преимущества предлагаемой среды позволят повысить эффективность диагностики бруцеллеза при бактериологическом исследовании клинического материала на наличие бруцелл.

1. Г.И.Лямкин, Л.В.Ляпустина, О.В.Малецкая, И.А.Соколова, И.Ф.Таран, Л.И.Ткаченко, В.Г.Дальвадянц, А.В.Тамбовцев. Состояние и перспективы лабораторной диагностики бруцеллеза. "Клиническая лабораторная диагностика", 2002, №12, с.46-47.

8. Химические реактивы и высококачественные химические вещества, Каталог, Москва, Химия, 1983, с.145, 365, 284.

Таблица
Сравнительная характеристика биологических показателей предлагаемой и известной сред
Питательные среды Тест-штаммы Скорость роста Чувствительность Ингибиция
Предлагаемая питательная среда Brucella abortus 19 ВА 2-3 суток Колонии бесцветные, с перламутровым оттенком, d=0,2-0,5 мм из разведения 10 -6 Тест-штаммов S.aureus 209-P, E.coli 168/59, Pr.vulgaris HX19 n 222 полная из разведения 10 -3
Известная питательная среда для выделения бруцелл + селективная добавка Brucella abortus 19 ВА 4-5 суток Колонии бесцветные, с перламутровым оттенком, d=0,2-0,5 мм из разведения 10 -6 Тест-штаммов S.aureus 209-P, E.coli 168/59, Pr.vulgaris Hxl9 N 222 из разведения 10 -3

Claims ( 1 )

Питательная среда для выделения бруцелл, содержащая источник азотистого питания, стимулятор роста, агар микробиологический, Д(+) глюкозу, натрия хлорид, ингибиторы сопутствующей микрофлоры, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве источника азотистого питания питательный бульон для культивирования микроорганизмов и пептон ферментативный, в качестве стимулятора роста - витаминный препарат "ЭКД" и метабисульфит натрия, в качестве ингибитора сопутствующей микрофлоры - налидиксовую кислоту и кристаллический фиолетовый при следующем содержании компонентов, г/л дистиллированной воды:

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЁЗА

Для просмотра информации о патентах вам необходимо зарегистрироваться и оплатить 30-ти дневный доступ. Разовый платеж составит 149 рублей (НДС не облагается).

Способ электрохимического оксидирования функциональной поверхности кварцевого резонатора

Изобретение относится к прикладной биохимии и иммунологии и может быть использовано при конструировании гравиметрических иммуносенсоров на основе кварцевых резонаторов, а также при проведении опытно-конструкторских разработок. Раскрыт способ электрохимического оксидирования функциональной.

Способ химической модификации поверхности микроконтейнеров на основе сорбитана моностеарата производных флуоресцеина

Изобретение относится к способу химической модификации поверхности микроконтейнеров на основе сорбитана моностеарата производными флуоресцеина, осуществляемый путем активирования поверхности ниосом раствором периодата натрия с последующей инкубацией активированных ниосом с раствором первичного.

Способ оценки иммуногенности вакцины чумной живой с использованием антигенспецифических клеточных тестов in vitro

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, в частности к способу оценки иммуногенности вакцины чумной живой с использованием антигенспецифических клеточных тестов in vitro и проточно-цитометрического анализа. Настоящий способ заключается в определении у вакцинированных нелинейных.

Питательная среда плотная для культивирования бруцелл вида brucella neotomae

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда плотная для культивирования бруцелл вида Brucella neotomae содержит печеночный отвар, пептон сухой ферментативный, сыворотку крови плодов коровы жидкую, натрий хлористый, глюкозу, глицерин, метабисульфит натрия, микробиологический агар и.

Питательная среда плотная для хранения микроба чумы

Изобретение относится к микробиологии, в частности к питательным средам для микроорганизмов. Питательная среда плотная для хранения микроба чумы содержит ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар.

Питательная среда плотная на основе вторичного продукта гидролизата говяжьего мяса для культивирования микроорганизмов

Изобретение относится к микробиологии, а именно к приготовлению плотных питательных сред, которые создают оптимальные условия для культивирования микроорганизмов. Питательная среда для культивирования микроорганизмов содержит основу вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса.

Питательная среда плотная для культивирования возбудителя инфекционного эпидидимита баранов b.ovis

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Плотная питательная среда для культивирования возбудителя инфекционного эпидидимита баранов содержит мясную воду, печеночный отвар, пептон сухой ферментативный, натрий хлористый, 10%-ный раствор натрия углекислого кислого, глюкозу.

Питательная среда плотная для культивирования и сбора биомассы вакцинного штамма чумного микроба y.pestis ev

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду плотную для культивирования и сбора биомассы вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV, включающая питательную основу; натрий хлористый; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный; натрий.

Питательная среда для культивирования yersinia pestis ev

Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования Yersinia pestis EV, содержащая пермеат из ретентанта ферментативного гидролизата кукурузной патоки жидкой, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12%, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый.

Способ получения бруцеллёзного антигена для клеточных тестов in vitro

Изобретение относится к медицине и биотехнологии. Предложен способ получения бруцелезного антигена. Способ включает культивирование Brucella abortus 19 ВА на плотной питательной среде с последующей водно-солевой экстракцией 2,5% раствором NaCl 1:1 в течение суток, разрушением микробных клеток.

Питательная среда для выращивания легионелл

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение питательной среды, создающей оптимальные условия для выращивания легионелл, содержащей: ферментативный гидролизат легкого свиньи, ферментативный гидролизат желтка куриного яйца, калий фосфорнокислый.

Способ получения микрогравиметрического иммуносенсора

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен способ получения микрогравиметрического иммуносенсора. Сначала активируют поверхность кварцевого резонатора путем плазменного напыления полиэтиленимина с молекулярной массой менее 10 000 Да в течение 10 с в вакуумной установке при.

Питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению питательных сред для культивирования возбудителя листериоза. Питательная среда содержит ферментативный гидролизат бобов сои, ферментативный гидролизат из активированной эмбрионально-яичной массы перепелов, натрий хлористый, калий.

Среда высушивания жидкая для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма ev

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой жидкую среду высушивания для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма EV. Среда содержит 8,0-12,0 г/л желатина медицинского; 80,0-120,0 г/л сахарозы; 8,0-12,0 г/л тиомочевины; 2-3 мл 20%.

Питательная среда для культивирования легионелл

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к питательной среде для культивирования легионелл. Питательная среда для культивирования легионелл, в состав которой входит: ферментативный гидролизат сои бобов, калий фосфорнокислый 1 - замещенный, калий фосфорнокислый 2 -.

Бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для выделения и выращивания бруцеллезного микроба. Питательная среда включает плотную и жидкую фазы. Плотная фаза содержит мясную воду, пептон сухой ферментативный, печеночный.

Способ определения внутренней энергии биоспецифически взаимодействующей суспензии реакции агглютинации объемной

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения внутренней энергии биоспецифически реагирующей суспензии реакции агглютинации объемной (РАО) с бруцеллезными или туляремийными растворами антител и суспензиями клеток. Для этого проводят измерение разницы температур.

Способ консервации иммунопероксидазного конъюгата

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии производства иммунопероксидазных конъюгатов, используемых для выявления антигенов возбудителей инфекционных болезней в твердофазном иммуноферментном анализе. Изобретение заключается в разработке способа консервации иммунопероксидазного.

Способ дифференциации поствакцинного и инфекционного бруцеллёзного процессов по степени повышенной чувствительности организма к бруцеллам в условиях in vitro

Изобретение относится к области медицины и касается способа дифференциальной диагностики поствакцинального и инфекционного бруцеллезного процессов у людей в условиях in vitro. Охарактеризованный способ включает инкубацию цельной гепаринизированной крови с бруцеллезным жидким аллергеном -.

Питательная среда плотная для культивирования бруцелл

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Питательная среда для культивирования бруцелл содержит ферментативный гидролизат желатина, ферментативный гидролизат рыбной муки, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, глюкозу, натрий сернистокислый пиро, агар микробиологический и.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ БРУЦЕЛЛ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ПРИ ГЛУБИННОМ ВЫРАЩИВАНИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ МИНИМИЗИРОВАННОГО СОСТАВА

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов. Способ включает глубинное выращивание культуры бруцелл на минимизированной по содержанию белкового компонента жидкой питательной среде в условиях регуляции парциального давления растворенного в среде кислорода и дозированной подачи глюкозы по схеме: введение 10,0 г/л глюкозы в питательную среду перед засевом, затем непрерывное дозирование ее по 1,5 г/л в час с 16 по 19 ч роста и по 2,0 г/л в час с 20 по 24 ч роста. Способ обеспечивает повышение выхода биомассы бруцелл. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

Способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов, заключающийся в том, что глубинное культивирование осуществляют при температуре от 36,5 до 37,5°C в минимизированной по содержанию белкового компонента жидкой питательной среде следующего состава: ферментативный гидролизат мяса и дистиллированная вода в объеме из расчета конечной концентрации аминного азота в среде от 45,0 до 55,0 мг%; дрожжевой экстракт сухой - 2,5 г/л; Fe2(SO4)3⋅3H2O - 7,0 мг/л; MnSO4⋅5H2O - 2,0 мг/л; KH2PO4 - 1,13 г/л; MgSO4⋅7H2O - 0,23 мг/л; никотиновая кислота - 2,0 мг/л; тиамина хлорид - 0,2 мг/л; кальция пантотенат - 1,0 мг/л; с введением 10,0 г/л глюкозы в питательную среду перед засевом и непрерывным дозированием ее по 1,5 г/л в час с 16 по 19 ч роста и по 2,0 г/л в час с 20 по 24 ч роста; с поддержанием величины рН культуральной жидкости в пределах от 6,8 до 7, 2 ед. рН путем дозирования 12,5% водного раствора аммиака; с регуляцией парциального давления растворенного в среде кислорода от 20 до 25 pO2 с 1 по 11 ч роста, от 40 до 45 pO2 - с 12 по 23 ч роста, от 30 до 35 pO2 с 24 по 26-28 ч роста. 2. Способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов по п. 1, отличающийся тем, что концентрация посевного материала составляет от 0,5 до 1,0 млрд микробов/мл среды.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения биомассы бруцелл в технологии приготовления биопрепаратов на их основе.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В качестве основы для приготовления различных препаратов для диагностики бруцеллеза в настоящее время широко используется вакцинный штамм 19ВА Brucella abortus [RU 2163141 C1, 20.02.2001]. Кроме того, для специфической профилактики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных применяются живые вакцины из штаммов 19 В. abortus и Rev-1 B. melitensis [Наставление по применению вакцины живой сухой против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма бруцелла абортус 19 (1996), Наставление по применению вакцины живой нативной из штамма Rev-1 бруцелла мелитензис для иммунизации баранов против инфекционного эпидидимита (1995)]. Основным этапом технологии изготовления указанных препаратов является процесс получения микробной биомассы возбудителя бруцеллеза с необходимой концентрацией и в достаточном объеме. В биотехнологии для получения стандартизованных культур микробов достаточно глубоко разработан и нашел широкое практическое применение способ периодического глубинного культивирования.

Для глубинного выращивания бруцелл в технологии приготовления биопрепаратов чаще всего используют жидкие питательные среды на основе перевара Хоттингера с высоким содержанием белкового компонента с добавлением глицерина, глюкозы и дрожжевого экстракта [Девришов Д.А., Кузнецов С.М., Шведов Д.В. и др. Сравнительная оценка ростовых свойств питательной среды для приготовления живой бруцеллезной вакцины из штамма Rev-1 // Ветеринарная медицина.- 2007. - №1. - С. 6-7, Лузан Н.С. Усовершенствование промышленных технологий производства бруцеллезной вакцины и диагностикумов из штамма Brucella abortus 19. - Дисс… канд. биол. наук. - Щелково, 2001. - 124 с.]. Однако необходимо отметить, что высокое содержание гидролизата ценного пищевого продукта в составе среды существенно удорожает ее стоимость и определяет наличие большого количества балластных примесей в получаемых культурах.

Имеющиеся экспериментальные данные по динамике утилизации свободных аминокислот в процессе выращивания бруцелл позволяют сделать вывод о том, что большинство питательных сред, используемых при получении биопрепаратов, содержат в своем составе белковые гидролизаты в концентрации, значительно превышающей питательные потребности данного микроорганизма [Юдин Ю.И., Жаворонкова Л.В., Шабалин Б.А. и др. Оценка возможности использования «минимизированных» питательных сред на основе различных гидролизатов для глубинного выращивания бруцелл // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 60-летию филиала ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России - ЦВТП БЗ» «Актуальные проблемы биологической защиты войск и населения. Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Эпидемиология и эпизоотология. Микробиология. Биотехнология. Экология», 16 июля 2009 г., Екатеринбург. - Екатеринбург, 2009. - С. 111-113]. Данное обстоятельство указывает на принципиальную возможность снижения количества белкового компонента в используемой питательной среде.

Известен способ получения бруцеллезного антигена из штамма Brucella abortus 19 для изготовления единого бруцеллезного антигена для реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента (РСК) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК), составной частью которого является получение микробной культуры методом глубинного выращивания в биореакторе [RU 2085212 С1, 15.08.1996]. Способ требует использования дорогостоящей питательной среды, при этом уровень накопления микробных клеток в глубинной культуре (около 30 млрд микробов/мл - величина определена при анализе технологической цепочки изготовления препарата) является средним и может быть повышен.

Известен способ получения бруцеллезного антигена штамма Brucella abortus 19 для изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК, бруцеллезного антигена для Роз-бенгал пробы (РБП) и бруцеллезного антигена для кольцевой реакции (КР) с молоком, способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки и диагностические наборы [RU 2361610 С1, 20.03.2008]. В приведенной группе изобретений описан наиболее близкий к заявляемому существующий глубинный способ получения микробной культуры штамма В. abortus 19, который имеет ряд недостатков: сравнительно высокий расход белкового гидролизата (перевара Хоттингера) на основе дорогостоящего пищевого сырья для приготовления среды, содержание которого составляет 25% по объему; повышенное содержание балластных примесей в связи с высокой концентрацией белкового компонента в используемой питательной среде (содержание аминного азота от 1,40 до 1,60 г/л); использование высоких концентраций посевного материала (от 3,5 до 5,0 млрд микробов/мл) на стадии производственного глубинного культивирования. Кроме того, в указанном способе не реализован достаточно известный метод подпитки микробной культуры субстратом в процессе глубинного выращивания, обеспечивающий стабильное повышение концентрации клеток в получаемой культуре.

Задачей предлагаемого способа является повышение выхода микробных клеток в глубинной культуре, снижение себестоимости используемой питательной среды, уменьшение содержания балластных примесей в получаемых препаратах.

Технический результат заключается в обеспечении достаточного накопления биомассы бруцелл вакцинных штаммов в глубинной культуре, снижении себестоимости используемой питательной среды и уменьшении содержания балластных примесей.

Для выполнения заявленного технического результата предлагается:

использование минимизированной по содержанию белкового компонента жидкой питательной среды;

культивирование бруцелл вакцинных штаммов в биореакторе в условиях дозирования глюкозы по заданной схеме, поддержания величины рН среды на определенном уровне путем автоматического дозированного введения раствора аммиака и регуляции парциального давления растворенного в культуральной жидкости кислорода на протяжении всего процесса культивирования.

Минимизированная жидкая питательная среда имеет следующий состав: ферментативный гидролизат мяса до содержания аминного азота в среде - от 0,45 до 0,55 г/л; дрожжевой экстракт сухой - 2,50 г/л; Fe2(SO4)3⋅3H2O - 7,00 мг/л; MnSO4⋅5H2O - 2,00 мг/л; KH2PO4 - 1,13 г/л; MgSO4⋅7H2O - 0,23 г/л; никотиновая кислота - 2,00 мг/л; тиамина хлорид - 0,20 мг/л; кальция пантотенат - 1,00 мг/л; глюкоза (суммарное количество за цикл выращивания) - 26,00 г/л, вода дистиллированная - до расчетного объема; рН среды - от 6,8 до 7,2 ед. рН.

Схема дозированного введения глюкозы предусматривает одномоментное введение ее в питательную среду перед засевом в концентрации 10,0 г/л, с 16 по 19 ч роста - непрерывное введение по 1,5 г/л в ч, с 20 по 24 ч роста - непрерывное введение по 2,0 г/л в час. Оптимальную величину показателя рН культуральной жидкости в диапазоне от 6,8 до 7,2 ед. рН поддерживают автоматическим дозированным введением 12,5% водного раствора аммиака.

По отношению к существующему способу предлагаемый способ имеет ряд отличий (таблица 1).

Применение заявляемого способа обеспечивает накопление микробных клеток в глубинной культуре в концентрации до 85-90 млрд микробов/мл, уменьшение себестоимости используемой жидкой питательной среды и снижение содержания белковых балластных примесей в микробной культуре. Продолжительность процесса глубинного культивирования составляет от 26 до 28 ч.

Заявляемое изобретение подтверждается следующими примерами практического применения.

Глубинное культивирование в биореакторе осуществляют по следующему режиму:

температура культивирования - от 36,5 до 37,5°С;

величина показателя рН культуральной жидкости - от 6,8 до 7,2 ед. рН;

парциальное давление растворенного кислорода (в процентах от насыщения) поддерживают по схеме: с 1 по 11 ч роста - от 20 до 25 pO2; с 12 по 23 ч роста - от 40 до 45 pO2; с 24 по 26-28 ч роста - от 30 до 35 pO2;

введение глюкозы в процессе выращивания осуществляют по схеме: с 16 по 19 ч роста - непрерывно по 1,5 г/л в час; с 20 по 24 ч роста непрерывно по 2,0 г/л в час.

Технологические параметры процесса глубинного культивирования поддерживают следующими управляющими воздействиями:

поддержание температуры - подачей термостатированной воды в рубашку биореактора;

поддержание величины показателя рН культуральной жидкости - автоматическим дозированным введением 12,5% водного раствора аммиака;

поддержание парциального давления растворенного кислорода - регуляцией расхода воздуха на аэрацию и изменением скорости вращения мешалки.

Введение 12,5% водного раствора аммиака в глубинную культуру осуществляют методом автоматического дозирования при снижении величины показателя рН культуральной жидкости менее 6,8 ед. рН. По окончании процесса культивирования при стабилизации величины показателя рН культуральной жидкости на уровне от 7,0 до 7,2 ед. рН перемешивание прекращают и проводят ее аэрацию в течение 0,5-3 ч. Критерием завершения процесса глубинного выращивания является самопроизвольное повышение рН культуральной жидкости до величины 7,4 ед. рН.

С использованием заявляемого способа были получены 3 серии глубинной культуры штамма 19ВА В. abortus. Продолжительность культивирования составила от 26 до 28 ч.

В таблице 2 представлены результаты оценки биологических свойств, антигенных и иммуногенных характеристик серий глубинных культур штамма 19ВА В. abortus с учетом их целевого назначения для использования при приготовлении вакцинных и диагностических препаратов.

При оценке устойчивости к криоконсервации культуру стабилизируют защитной средой, замораживают при температуре от минус 18 до минус 22°С, хранят при указанной температуре в течение 3 сут., после чего реактивируют в течение 40 мин при температуре от 36 до 38°С и определяют выживаемость микробов.

Глубинное выращивание культуры бруцелл проводят аналогично примеру 1, но вместо штамма 19ВА В. abortus используют штамм Rev-1 B. melitensis.

С использованием заявляемого способа были получены 3 серии глубинной культуры штамма штамма Rev-1 B. melitensis. Продолжительность культивирования составила от 26 до 28 ч.

В таблице 3 представлены результаты оценки биологических свойств, антигенных и иммуногенных характеристик серий глубинных культур штамма Rev-1 B. melitensis с учетом их целевого назначения для использования при приготовлении вакцинных и диагностических препаратов. Оценку иммуногенности и устойчивости к криоконсервации осуществляют аналогично примеру 1.

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Читайте также: