ОПИСТОРХОЗ ПЛОТОЯДНЫХ

Обновлено: 24.09.2022

Описторхоз вызывается трематодой Opisthorchis felineus из сем. Opisthorchidae. Паразитируют описторхи в желчных ходах печени у собак, кошек, человека и диких пушных зверей - лисиц, песцов, соболей, ондатр и степных хорьков. Значительное очаговое распространение эта болезнь имеет в бассейнах рек Оби и Иртыша, реже в бассейнах рек Печоры, Днепра, Дона, Волги, Северной Двины и Немана.

Жизненный цикл. Описторх развивается со сменой трех групп хозяев: дефинитивных (домашних плотоядных, диких пушных зверей и человека), промежуточных - пресноводного моллюска (Bithynia leaclii) и дополнительных (карповых рыб).

Яйца описторха со сформированным мирацидием попадают в воду, где они заглатываются моллюсками (битипиями). Вылупившийся в кишечнике моллюска мирацидий мигрирует в полость тела и превращается в спороцисту. В ней образуются редии, а в теле последних церкарии, которые, выйдя в воду, активно проникают через кожные покровы в мышцы рыб, где превращаются в инвазионную стадию - метацеркариев. Церкарии формируются в теле моллюска через месяц, метацеркарии в теле рыбы спустя 1,5 месяца (рис. 9). Животные и человек заражаются при поедании рыбы, инвазированной метацеркариями описторха. В печени дефинитивных хозяев паразит становится половозрелым через 3-4 недели, а весь цикл развития описторха продолжается 4-4,5 месяца.

Эпизоотологические данные. Факторы передачи инвазии - сырая, мороженая, малосоленая, а также вяленая рыба, инвазпрованная метацеркариями описторха. Нередко люди заражаются описторхозом в Сибири при употреблении в пищу свежемороженой рыбы (строганины), а домашние хозяйки и повара - при пробовании на вкус сырой рыбы и фарша перед кулинарной обработкой. В распространении описторхоза большую роль играют фекалии больных людей, а также инвазированных животных, которые попадают в необеззараженном виде в водоемы - места обитания (поймы рек глубиной от 0,5 до 6 м, заросшие растительностью). Метацеркариями описторха часто бывают инвазированы лещ, плотва, красноперка, язь, и другая рыба.

Патогенез. Описторхи оказывают механическое действие на слизистые оболочки желчных ходов печени, что ведет к их воспалению, расширению, затруднению оттока желчи. При высокой интенсивности инвазии развивается цирроз печени. Продукты обмена веществ паразита усугубляют патологический процесс в печени и других органах вследствие антигенного влияния.

Клинические признаки. У больных животных и человека наблюдается желтушность слизистых оболочек, боль , в правом подреберье, угнетенное состояние, прогрессирующее исхудание. Иногда отмечают смертельные случаи.

Патологоанатомические изменения. Печень увеличена и уплотнена. На поверхности печени заметны многочисленные кистообразные утолщения желчных протоков, цирроз, желчный пузырь увеличен в размере. В желчных протоках и желчном пузыре может быть обнаружено от нескольких единиц до 5 тыс. описторхов у животных.

Диагноз. Прижизненный диагноз на описторхоз устанавливают при исследовании фекалий животных методом последовательного промывания, посмертно - при вскрытии трупов плотоядных, обнаружении трематод и характерных патологоанатомических изменений в печени.

Подсобное диагностическое значение имеет исследование поверхностных мышц хвоста и спины рыб под лупой с 10- или 20-кратным увеличением. Метацеркарий возбудителя описторхоза овальной формы, покрыт толстостенной оболочкой (цистой), небольшой величины (0,3X0,23 мм).

Лечение. Высокой эффективностью при описторхозе собак, кошек, песцов и соболей обладает гексахлорпараксилол, назначаемый в дозе 0,4-0,6 г/кг в смеси с небольшим количеством мясного фарша, однократно, индивидуально или групповым методом, после 14-часовой голодной диеты. В медицине успешно применяют хлоксил (аналог гексахлорпараксилола).

Профилактика. В районах, неблагополучных по описторхозу, важное профилактическое значение имеют такие мероприятия, как запрещение скармливания плотоядным и употребление в пищу людям сырой (мороженой) рыбы, широкая санитарно-просветительная работа среди населения (совместно с медиками), уничтожение или надежная утилизация трупов И тушек собак, кошек и пушных зверей (после снятия шкурок) и плановая дегельминтизация лисиц и песцов в зверохозяйствах за месяц до гона и через десять дней после отъема щенят, гельминтологическое исследование рыбы на рынках.

Описторхоз плотоядных

Описторхоз плотоядных - природно-очаговая болезнь собак, кошек, пушных зверей, редко свиней и человека, вызываемое трематодой Opistorchis falineus (кошачья, или сибирская, двуустка) сем. Opisthorchidae.

Локализация - желчные ходы печени, желчный пузырь, реже протоки поджелудочной железы.

Биология развития. Описторхисы - биогельминты. Дефинитивные хозяева - собака, кошка, лисица, лев, песец, соболь, свинья, человек. Промежуточные хозяева - пресноводные моллюски (Bithynia Leachi), дополнительные хозяева - рыбы семейства карповых (карп, линь, вобла, лещ, плотва, сазан) и т. д.

Яйца трематоды попадают в воду, где заглатываются моллюсками. В их кишечнике вылупляются мирацидии, мигрирующие в печень и превращающиеся в спороцисту. В печени моллюска образуются редии, затем церкарии, которые, выйдя в воду, активно внедряются через кожу в мышцы рыб, превращаясь в дальнейшем метацеркарии - инвазионную стадию. Срок развития от яйца до метацеркария 2,5 мес. размер метацеркария 0,2-0,3мм.

Животные и человек заражаются при употреблении сырой, слабо мороженой или вяленой рыбы, инвазированной метацеркариями. Из кишечника дефинитивного хозяина юные паразиты проникают через желчные протоки в печень и через поджелудочные протоки - в поджелудочную железу. Описторхисы в печени дефинитивного хозяина достигают половой зрелости за 1 месяц, продолжительность жизни у плотоядных более 3-х лет, в организме человека -10-20 лет.

Эпизоотологические данные. Описторхоз имеет очаговое распространение на территории бассейнов рек Оби, Иртыша, реже - Печоры, Днепра, Дона, Волги, Лены. Основном источник распространения инвазии - человек и плотоядные животные. Значительная роль в распространении принадлежит традициям народов Севера, которые часто употребляют рыбу в сыром виде.

В отдельных природных очагах процент зараженности у кошек достигает 80-90% у человека - до 80% .

Патогенез и симптомы болезни. В патогенезе описторхоза основную роль играют аллерготоксические реакции, механическое воздействие трематод, нервно-рефлекторное влияние и возникновение вторичной инфекции в результате инокуляции микрофлоры. У зараженных животных через 15-20 сут после заражения понижается аппетит, отмечается угнетение состояние, расстройство пищеварения, желтушность видимых слизистых оболочек и болезненность в области печени.

Патологоанатомические изменения. При интенсивной инвазии печень уплотнена, желчные и поджелудочные протоки сильно расширены, из разрезанных протоков вытекает желтовато-зеленая масса, содержащая паразитов. Иногда отмечают разрастание в печени в виде папиллом, опухолей и в следствии этого бугристость на поверхности при пальпации.

Диагноз. При жизни, кроме эпизоотологических данных и клинических признаков, для диагноза используют метод последовательных смывов фекалий. Эффективны методы флотации с применением раствора гипосульфата Na по Щербовичу и азотнокислого Na по Калантаряну. Можно использовать и иммунобиологические реакции через 15-20мин. После введения аллергена (0,1 мл в/к в наружную поверхность ушной раковины) у зараженных животных образуется хорошо видимая и легко прощупываемая папула 1,5-2см в диаметре.

Лечение. При описторхозе высокоэффективны иксихол и политрем назначаемые собакам кошкам, песцам, лисам и соболям в дозе 0,2 г/кг и 0,15г/кг соответственно в смеси с мясным фаршем, однократно, индивидуально после 12 часового голодания. Применяют дронцит (празиквантел) -0,1г/кг.

Профилактика. Большое значение в борьбе с инвазией имеет ветеринарно-санитарные мероприятия: оборудование закрытых уборных; охрана водных ресурсов от загрязнения навозом животных.

Дегельминтизацию собак и кошек необходимо проводить не реже двух раз в год.

Описторхоз

ОПИСТОРХОЗ - тяжёлое заболевание из группы гельминтозов, поражающих печень и поджелудочную железу.

Возбудитель описторхоза - двуустка сибирская, или кошачья ( Opisthorchis felineus ), паразитирует у человека, кошек, собак, свиней в печени, желчном пузыре и поджелудочной железе. Паразит имеет плоскую форму, похож на огуречное семечко, ротовая полость снабжена присосками, размеры тела - 10 - 12 мм. Количество гельминтов может достигать десятков тысяч экземпляров.

В мире около 21 миллиона человек инфицированы описторхами, из них 2/3 - жители России. В Западной Сибири сформировался природный очаг, в котором присутствуют три хозяина необходимых для развития двуустки.

Окончательный хозяин и основной источник инвазии - больной человек и животные домашние (собаки, свиньи, кошки) и дикие (лисы, выдры, песцы), употребившие в пищу зараженную рыбу семейства карповых. Все с калом выделяют яйца возбудителей, которые с талыми водами попадают в водоемы, где их заглатывают улитки - промежуточный хозяин. В них развиваются тысячи личинок - церкариев. Из моллюсков личинки выходят, свободно плавают в воде, но не являются опасными для человека, поэтому через воду описторхозом заразиться нельзя. Церкарии проникают в карповых рыб - дополнительных хозяев (карп, карась, жерех, язь, елец, плотва, лещ, линь, чебак, красноперка, уклея, гольян, подуст). Личинки описторхисов внедряются под кожу только рыбы карповых пород и становятся инвазионными, т.е. способными вызвать заражение человека. Сырок относится к виду сиговых, поэтому не опасен в отношении описторхоза!

Человек заражается при употреблении в пищу рыбы карповых пород в не обезвреженном виде: сырой, недостаточно прожаренной и слабопросоленной рыбы. Проникшие в желчевыводящую систему и поджелудочную железу метацеркарии через 3 - 4 недели достигают половой зрелости и начинают откладывать яйца. Полный цикл развития возбудителя описторхоза длится 4 - 4 ,5 месяца, живут паразиты 20 - 25 лет.

Личинки паразитов находятся в мышцах речной рыбы. При ее разделке происходит загрязнение разделочного инвентаря и возможное обсеменение других продуктов.

Описторхисы чрезвычайно прожорливы, разрушают печень, желчный пузырь, поджелудочную железу. Они питаются слизью желчных протоков, ротовой присоской засасывают, отрывают и поедают клетки слизистых оболочек; остаётся кровоточащая поверхность, паразиты заглатывают и кровь. Органы, где «расселяются оккупанты», зарастают рубцовой тканью, перерождаются, а в случае слабой иммунной защиты - развиваются злокачественные опухоли. Скопление паразитов в желчных протоках способствует их закупорке, нарушается отток желчи, и протоки деформируются.

Острый описторхоз длится от нескольких дней до 4 - 8 недель и сопровождается лихорадкой, головной болью, недомоганием, сыпью, ломотой в мышцах и суставах, тошнотой, рвотой. При тяжелом течении возможно развитие аллергического миокардита, эозинофильной мелкоочаговой пневмонии. Острая фаза может напоминать течение брюшного тифа, вирусных гепатитов, астмоидного бронхита.

Хронический описторхоз продолжается 15 - 25 лет и даже пожизненно, проявляется симптомами хронического холецистита, гастродуоденита, панкреатита, гепатита. Описторхозная инвазия приводит к нарушению нервной, иммунной систем. Серьезное последствие описторхоза - аллергические реакции в результате отравления организма продуктами обмена веществ и распада описторхисов и собственных тканей, травмированных паразитами. Скопление описторхисов, их яиц, слизи в желчных протоках, протоках поджелудочной железы создает препятствие для оттока желчи и панкреатического секрета, вызывая их застой.

К тяжелым осложнениям описторхоза относятся: желчный перитонит, абсцессы печени, цирроз печени, острый деструктивный панкреатит, рак печени и поджелудочной железы.

Для лечения описторхоза применяют препараты, действующие на плоских червей. Препараты применяются в медицинских учреждениях округа строго по назначению и под наблюдением врача.

После успешной дегельминтизации в организме могут оставаться необратимые последствия описторхоза в виде хронического гепатита, холангита, холецистита, гастрита, дисбаланса в иммунной системе.

ОПИСТОРХОЗ ЛЕГЧЕ ПРЕДУПРЕДИТЬ, ЧЕМ ЛЕЧИТЬ!

Меры личной профилактики просты:

· варить рыбу не менее 15 минут после закипания,

· жарить в распластанном виде в жире 20 минут,

· солить: мелкую рыбу 14 дней, крупную (более 25 см) 40 дней с добавлением соли 2 кг на 10 кг рыбы,

· после обработки рыбы тщательно мыть и ошпаривать кипятком ножи и разделочные доски.

Помните: нельзя скармливать сырую рыбу и рыбные отходы домашним животным.

Дефинитивного хозяина при описторхозе


Согласно статистике, на сегодняшний момент более миллиарда человек в мире инфицировано различными видами гельминтов - паразитических червей.

Описторхоз является самым распространенным и одним из наиболее опасных гельминтозов, передающихся через зараженную рыбу.

Большое значение в распространении возбудителя описторхоза приобрели массовые миграции населения, отток людей, занятых на вахтовой и экспедиционно-вахтовой работе в эндемичных по описторхозу территориях.

Проблема описторхоза осложняется неконтролируемым увеличением числа рыбоперерабатывающих предприятий, грубо нарушающих технологический режим обеззараживания рыбы от личинок гельминта и реализующих населению эпидемически опасную продукцию.

В структуре биогельминтозов на территории Российской Федерации в 2017 году на долю описторхоза приходилось 78,53 % - более 18,7 тыс. случаев описторхоза.

Официальная статистика учитывает только тех пациентов, которые обратились в медучреждения. Следует отметить, что болезнь длительное время может протекать в латентной форме, прежде чем привести к необратимым изменениям в желчевыводящей системе и печени.

Как происходит заражение?

Инфицирование происходит при употреблении сырой или недостаточно термически обработанной зараженной речной рыбы.

Источником инвазии является больной человек, с калом которого, а также больных животных, яйца паразита попадают в воду, где их заглатывают улитки, в которых происходит размножение личинок паразита, заканчивающееся выходом в воду личинок-церкариев. Церкарии проникают в карповых рыб (язь, елец, плотва, лещ, линь, красноперка, гольян, жерех, подуст).



Одна из особенностей заражения гельминтами рода Opisthorchis felineus, как отметили ученые, - отсутствие каких-либо настораживающих симптомов у инфицированных людей.

Зараженные описторхозом входят в группу риска по развитию опухолей печени.

Ряд проведенных в мире исследований позволяет предположить наличие взаимосвязи между описторхозом и развитием злокачественных опухолей печеночных желчных протоков, на долю которых приходится от 10 до 20% всех случаев рака печени.

Клинические проявления заболевания

Инкубационный период заболевания составляет от 2 до 4 недель, в среднем - 21 сутки.

В случае, если течение заболевания средне-тяжелое, помимо симптомов общей интоксикации, отмечается лихорадка до 39 о С, тошнота, рвота, нервная возбудимость, агрессивность, не проходящая боль в правом подреберье.

При выраженном описторхозе, при обширной инвазии, большом количестве двуусток, на коже возможны высыпания по типу крапивницы.

Нередки проявления со стороны сердечно-сосудистой системы: появляются неприятные ощущения в области сердца, снижается артериальное давление.

Постепенно болезнь переходит в хроническую форму. При этом хронический описторхоз может протекать практически бессимптомно на протяжении долгого времени, пока поражения печени и желчного пузыря не станут обширными. Описторхоз нарушает обмен веществ, сказывается на кроветворной функции, провоцирует развитие рака желчного пузыря и цирроза печени.

Чтобы избежать заболевания необходимо соблюдать меры профилактики.

Профилактика

Управления Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации по плану-графику, согласованному с руководством рыбодобывающих организаций, определяют места отлова, сроки и видовой состав рыб.

Проводится оценка паразитологического состояния водоема.

При обнаружении в водоеме рыб, зараженных личинками описторхиса, всю рыбу данного вида и остальных видов, способных играть роль дополнительных хозяев описторхисов, а также рыбную продукцию подвергают обеззараживанию от личинок описторхисов перед реализацией.

Вся рыбопродукция из водоема допускается к сертификации и реализации только после ее обеззараживания.

Управления Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации осуществляют надзор за проведением санитарно-паразитологического контроля в рыбоперерабатывающих и торговых организациях, на предприятиях общественного питания.

Проводится обязательный паразитологический контроль каждой партии готовой рыбной продукции холодного копчения, пресервов, соленой, пряной, маринованной (бочковой), вяленой рыбы. Готовая продукция не должна содержать жизнеспособных личинок описторхиса.

Обеззараживание рыбы и рыбной продукции осуществляется замораживанием, посолом и тепловой обработкой.

При невозможности обеспечить замораживание рыбы, гарантирующие обеззараживание рыбы, ее следует использовать для пищевых целей только после термической обработки или стерилизации (консервы).

Варить рыбу следует порционными кусками не менее 20 мин. с момента закипания, рыбные пельмени - не менее 5 мин. с момента закипания.

Рыбу (рыбные котлеты) необходимо жарить порционными кусками в жире 15 мин. Крупные куски рыбы весом до 100 г жарить в распластанном виде не менее 20 мин. Мелкую рыбу можно жарить полностью в течение 15-20 мин.

Моделирование у мышей C57BL/6J повторной описторхозной инфекции трематодой O. felineus (Rivolta, 1884)

Г.Б. Вишнивецкая, научный сотрудник Лаборатории молекулярных механизмов патологических процессов;
А.В. Катохин, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Отдела генетики насекомых;
В.А. Напримеров, кандидат ветеринарных наук, заведующий Центром коллективного пользования «Виварий конвенциональных животных»;
Е.Л. Завьялов, кандидат биологических наук, заведующий Центра коллективного пользования «SPF-виварий»;
Д.Ф. Августинович, доктор биологических наук, старший научный сотрудник Лаборатории молекулярных механизмов патологических процессов

Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения РАН
630090, Россия, Новосибирск, проспект акад. Лаврентьева, 10

Резюме

Описторхоз - инфекционное заболевание, возникающее при попадании личинок трематод семейства Opisthorchiidae в желудочно-кишечный тракт млекопитающих. Основным возбудителем описторхоза в Европе и РФ является представитель данного семейства - кошачья двуустка, Opisthorchis felineus (O. felineus).

В настоящее время описторхоз рассматривают как системное заболевание, при котором страдает не только печень, основное место локализации паразитов, и другие органы и системы, в том числе центральная нервная. Поэтому актуально исследование этой паразитарной инфекции и моделирование описторхоза на лабораторных животных.

На самцах мышей линии C57BL/6J моделировали хронический описторхоз при однократном и двукратном инфицировании животных метацеркариями трематоды O. felineus, полученными из инфицированных язей, выловленных из реки Обь в Новосибирской области. Все эксперименты проводили в SPF-виварии. Сравнивали 3 группы животных: 1-я - контрольные неинфицированные (n=10); 2-я - однократно инфицированные личинками O. felineus (n=12); 3-я - повторно инфицированные через 3 мес после 1-й инвазии (n=18).

Введение личинок осуществляли внутрижелудочно с помощью специализированных зондов. Через 6 мес от начала эксперимента было обнаружено большее количество гельминтов в печени мышей после двукратного инфицирования по сравнению с однократным. Причем увеличение числа гельминтов отмечено за счет неполовозрелых форм паразита, при этом размер половозрелых форм O. felineus варьировал от 1,5 до 3 мм.

На фоне двукратного инфицирования установлено усиление негативного воздействия гельминтов на физиологическое состояние хозяина паразита. У этих животных наблюдалась повышенная активность фермента аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови, основного маркера воспалительных процессов в печени. Кроме того, у мышей снижалась масса тела к концу эксперимента и наблюдалась гепатоспленомегалия. При однократном инфицировании увеличения весовых индексов печени и селезенки были менее выраженными, а активность АЛТ не отличалась от контрольных значений.

Следовательно, мыши линии C57BL/6J могут быть использованы для моделирования описторхоза в лабораторных условиях, причем двойное инфицирование оказывает более выраженное негативное воздействие на организм хозяина.

Введение

Внедряясь в желчные протоки печени, личинки O. felineus способствуют развитию заболеваний, прежде всего печени. На фоне хронического описторхоза развиваются такие заболевания, как холангит, холангиохолецистит, холангиогепатит, холангитический цирроз печени [4]. Отмечают связь между описторхозом, вызванным O. felineus, и опухолями в печени [5, 6]. Кроме того, описторхоз рассматривают как системное заболевание, при котором происходят нарушения в других органах и системах организма, вплоть до центральной нервной системы (ЦНС) [7].

Актуальность исследования особенностей инвазии паразита и системных изменений в организме хозяина после заражения O. felineus обусловлена продолжающимся поиском эффективной терапии этого заболевания. Однако проведение этих исследований требует удобных, дешевых и легко воспроизводимых моделей описторхоза. Чаще всего описторхоз моделируют на сирийских хомячках, что объясняется лучшей приживаемостью описторхид у этих животных. Иногда исследования проводят на других представителях млекопитающих (лисицах, песчанках, крысах), еще реже используют мышей, хотя в природных популяциях гельминт O. felineus обнаруживается у разных мышеобразных грызунов (водяная и европейская рыжая полевка, малая лесная, желтогорлая, полевая и домовая мыши) [8]. Обнаружена равная степень заражения личинками O. felineus у сирийских хомячков и мышей линии C57BL/6 на острой стадии (2 нед) экспериментального описторхоза [9], тогда через 6 мес после инфицирования наблюдаются значительные межвидовые различия по количеству паразитов в желчных протоках печени. При равной дозе инфицирования (100 метацеркарий на 1 животное) у хомячков отмечалось 32,0±2,0 паразитов [10], тогда как у мышей только 10,9±4,0 [11]. Однако учитывая разницу в массе печени у инфицированных животных (около 2 г - у мышей и 6,5-7 г - у хомячков), паразитарная нагрузка (количество паразитов на 1 г печени) у 2 видов животных оказалась сопоставимой. На основании этих данных было высказано предположение, что мыши линии C57BL/6J также могут быть использованы для моделирования описторхоза в лабораторных условиях.

Поскольку в природных популяциях инфицирование млекопитающих происходит зачастую многократно, в нашей работе исследовали эффективность инфицирования и развитие паразитов при однократном и двукратном введении личинок трематоды O. felineus мышам линии C57BL/6J. При этом планировали оценить не только степень инфицирования животных, но и их состояние по ряду физиологических показателей, поскольку известно, что кратность заражения во многих случаях коррелирует со степенью проявления патологических признаков у хозяина паразита [12].

Материал и методы

Животные. Работа выполнена на базе ЦКП «SPF-виварий» Института цитологии и генетики Сибирского отделения РАН (ИЦиГ СО РАН). В исследовании были использованы 40 самцов мышей в возрасте 11-12 нед. Животные содержались в клетках OptiMICE (Animal Care Systems, США), оснащенных индивидуальной системой подачи чистого воздуха, на базе ЦКП «SPF-виварий» ИЦиГ СО РАН при искусственном световом режиме 10:2:12 ч (свет:сумерки:темнота), температуре воздуха 22-26°С и влажности 40-50%. Животные имели свободный доступ к воде и гранулированному корму для лабораторных грызунов SPF-категории содержания «Чара» (ЗАО Ассортимент-Агро, Россия). Поили животных деионизированной водой, полученной на установке Millipore, после обогащения минеральной добавкой «Северянка» (ООО «Эко-Проект», Санкт-Петербург). В качестве подстилочного материала применяли обеспыленные гранулы лиственных пород древесины. Корм и подстилку перед каждым использованием автоклавировали при температуре 121°С. В каждой клетке было не более 4 мышей. Все процедуры проводили в соответствии с директивами European Communities Council от 24 ноября 1986 г. (86/609/EEC), а также заключением Комиссии по биоэтике ИЦиГ СО РАН (протокол № 26 от 13 марта 2015 г.).

Получение метацеркарий O. felineus. Личинки O. felineus были получены из инфицированных язей, выловленных из реки Обь в Новосибирской области. Рыбный фарш подвергали ферментативной обработке (11 мл концентрированной HCl + 7 г пепсина на 1 л воды) и инкубировали при температуре 37°C в течение ночи с последующей фильтрацией и осаждением в 0,9% растворе хлористого натрия. Под микроскопом определяли жизнеспособность отобранных метацеркарий для дальнейшего внутрижелудочного введения животным.

Процедура эксперимента. Животные были разделены на 3 группы: 1-я - контрольные (неинфицированные) животные (n=10); 2-я - однократно инфицированные личинками гельминтов O. felineus в дозе 90 метацеркарий на каждую особь (n=12); 3-я - повторно инфицированные через 3 мес после 1-го введения личинок паразита (n=18). Введение личинок осуществляли внутрижелудочно с помощью зондов (Braintree Scientific, Inc.). Через 6 мес от начала эксперимента всех мышей умерщвляли декапитацией и производили забор крови для дальнейшего биохимического исследования. Кроме этого, определяли массу печени и селезенки, которую далее пересчитывали на 1 г массы тела. Печень с желчным пузырем помещали в физиологический раствор для подсчета в дальнейшем числа марит O. felineus, извлеченных из желчных протоков. Состояние зрелости гельминтов определяли, используя микроскоп Altami CM0745 при 10 - 40-кратном увеличении.

Биохимический анализ. Цельную кровь, собранную при декапитации животных, центрифугировали (3000 об/мин, 20 мин, при 4°С), отделяли сыворотку, которую хранили при температуре -70°С до определения активности ферментов аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ). При анализе использовали стандартные наборы реактивов (Analyticon Biotechnologies AG, Германия). Измерения выполнены на биохимическом полуавтоматическом анализаторе «Stat Fax 4500 Plus» (Awareness Technology, США).

Статистика. Все показатели оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим post hoc сравнением групп по критерию Fisher LSD, используя пакет программ Statistica 6.0. Корреляции между показателями в группах определяли непараметрическим анализом по Спирмену (Spearman rank correlation coefficient). Данные представлены как среднее ±SEM. Различия считались статистически значимыми при p < 0,05 и на уровне тенденции - при 0,05 < p < 0,1.

Результаты и обсуждение

При подсчете количества гельминтов O. felineus в желчных протоках печени были установлены некоторые особенности, связанные с кратностью инфицирования животных. В обеих группах инфицированных мышей обнаружены как половозрелые мариты гельминтов с развитыми половыми органами, так и неполовозрелые, у которых визуализировались только 2 ветви кишечника, заполненные черным содержимым (рис. 1). При этом размер марит в обоих случаях варьировал. После однократного инфицирования, наряду с мелкими незрелыми маритами, были половозрелые размером около 3 мм. После двукратного инфицирования также присутствовали мелкие неполовозрелые мариты, а размер половозрелых варьировал от 1,5 до 3 мм.


Рис. 1. Мариты‚ выделенные из желчных протоков печени мышей через 6 мес после однократного (а) и двукратного (б) инфицирования личинками трематоды O. felineus. У половозрелых марит (П) видна продукция яиц‚ у неполовозрелых (НП) - только 2 ветви кишечника

Таким образом, можно предположить, при каждом последующем инфицировании мышей время созревания паразитов увеличивается. Подсчет всех гельминтов показал, через 6 мес после однократного инфицирования в печени мышей присутствовали преимущественно взрослые мариты O. felineus (рис. 2). При повторном инфицировании через 3 мес после первого число мелких неполовозрелых марит в печени мышей было больше, чем после однократного (p < 0,05), при этом несколько увеличивалось и число половозрелых. Обратную зависимость величины тела O. felineus от интенсивности заражения хозяина паразита отмечают и другие исследователи [13].

Согласно полученным данным можно заключить, что у мышей для созревания гельминтов требуется более 3 мес, причем повторное инфицирование животных увеличивает срок созревания вновь внедрившихся паразитов. Это отличает мышей от хомячков, у которых уже через 2 нед после инфицирования личинками O. felineus все мариты были половозрелыми [9]. Видимо, этим объясняется то, что при моделировании описторхоза в лабораторных условиях чаще всего используют сирийских хомячков и лишь в единичных случаях - мышей [14, 15]. Учитывая, что мыши - всеядные животные, а хомячки питаются преимущественно растительной пищей, не рыбой, которая является промежуточным хозяином для описторхид, можно предположить, что у мышей эволюционно выработались механизмы устойчивости против трематодных инфекций. Следует подчеркнуть, что выявление этих механизмов сопротивления трематодным инфекциям - не менее важная задача, чем изучение механизмов повышенной чувствительности к заражению. Оба этих направления исследования в равной степени актуальны в борьбе с описторхозной патологией у людей и животных. Возможно, устойчивость к инфекции O. felineus связана с высоким уровнем иммунной защиты у мышей. Так, по сравнению с сирийскими хомячками, у мышей C57BL/6J в крови значительно выше уровень лимфоцитов [9], главных клеток, осуществляющих контроль и иммунную защиту организма при инфекциях. Кроме того, у них почти в 2 раза больше относительная масса селезенки [9], основного органа периферической иммунной системы, в котором происходит пролиферация и дифференцировка T- и B-лимфоцитов крови. Как показали наши результаты, масса селезенки возрастает значительно на фоне инфицирования O. felineus у мышей обеих групп, причем в большей степени при двукратном инфицировании (рис. 3). При этом в обеих группах инфицированных животных относительные массы печени и селезенки коррелировали с общим число паразитов, извлеченных из печени (при однократном инфицировании: r=0,86, p=0,001 и r=0,73, p=0,011 соответственно; при двукратном инфицировании r=0,61, p=0,009 и r=0,71, p=0,001 соответственно). Учитывая то, что у мышей с двойным инфицированием снижалась масса тела и увеличивалась относительная масса печени и селезенки, можно говорить о более тяжелых последствиях повторного инфицирования личинками трематоды O. felineus у мышей C57BL/6J.


Рис. 3. Масса тела (а) и относительная масса печени (б) и селезенки (в) у мышей после однократного (х1) и двукратного (х2) инфицирования личинками O. felineus.
Примечание.
* - p < 0‚05; ** - p < 0‚01; (*) - 0‚05 < p < 0‚1 (тенденция) - по сравнению с контролем.

Результаты биохимических исследований подтверждают это предположение. Установлено, что у мышей после двукратного инфицирования повышается активность фермента АЛТ - главного маркера различных заболеваний печени (рис. 4). Поскольку этот показатель статистически значимо коррелировал с числом гельминтов как при однократном (r=0,81, p=0,004), так и при двукратном (r=0,66, p=0,015) инфицировании животных, можно говорить, что изменение этого показателя обусловлено развитием экспериментального описторхоза. Повышенный уровень активности другого фермента - АСТ - был обнаружен у мышей через 6 мес после однократного инфицирования, при двукратном инфицировании значение этого показателя было средним между показателем в контрольной группе мышей и у мышей с однократным инфицированием. Поскольку корреляционной связи между активностью АСТ и общим числом паразитов в печени в обоих случаях инфицирования не установлено (r=0,04, p=0,919 - при однократном и r=0,14, p=0,636 - при двукратном инфицировании), можно полагать, что АСТ в меньшей степени, чем АЛТ, отражает развитие патологического процесса. Тем более, что и в процентном отношении повышение уровня АЛТ при однократном и двукратном инфицировании было более выраженным (на 40 и 103% соответственно), чем повышение АСТ (на 25 и 11% соответственно). Фермент АЛТ находится в цитоплазме гепатоцитов, а АСТ является митохондриально-цитоплазматическим ферментом с выраженным преобладанием в митохондриях [16]. Повышение АСТ в крови свидетельствует о поражении преимущественно митохондрий, а повышение АЛТ - о более глубоких нарушениях в клетке, связанных с нарушением целостности плазматических мембран гепатоцитов. Таким образом, полученные биохимические данные свидетельствуют о более значимых нарушениях в печени у мышей на фоне двукратного инфицирования трематодой O. felineus, чем и обусловлена гибель гепатоцитов.

У людей хронический описторхоз приводит к изменению системы взаимодействий изучаемых биохимических показателей, в том числе обнаруживается значимая связь между активностью АЛТ и АСТ [17]. В нашем исследовании была получена высокая корреляционная связь между активностью 2 ферментов у мышей при двукратном инфицировании (r=0,57, p=0,041), тогда как у контрольных особей и у животных с однократным инфицированием таких значимых корреляций не обнаружено (r=-0,29, p=0,492 и r=0,20, p=0,580 соответственно). Это также свидетельствует о более выраженном развитии патологического процесса у мышей после двукратного инфицирования.

Заключение

Как показали результаты проведенного исследования, мыши линии C57BL/6J, наравне с сирийскими хомячками, являются хорошим лабораторным объектом при моделировании O. felineus-вызванного описторхоза. Через 3 мес после инфицирования в желчных протоках печени животных обнаружены половозрелые и неполовозрелые мариты паразита. Повторное инфицирование мышей спустя 3 мес после 1-го увеличивало их количество преимущественно за счет числа неполовозрелых особей O. felineus. Двойное инфицирование оказывало более выраженное негативное воздействие на организм хозяина и сопровождалось повышением активности фермента АЛТ - основного маркера воспаления в печени. Кроме того, дважды инфицированные мыши характеризовались более выраженным снижением массы тела и увеличением весового индекса печени и селезенки, что является признаками описторхоза. Считаем, что мыши линии C57BL/6J могут быть использованы для исследования механизмов развития описторхоза, а также для преклинических исследований эффективности новых антигельминтных препаратов.

Благодарности

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант №17-04-00790) и бюджетного проекта ФИЦ ИЦиГ СО РАН (№0324-2019-0041). Исследования проведены с использованием оборудования Центра генетических ресурсов лабораторных животных ФИЦ ИЦиГ СО РАН, поддержанного Минобрнауки России (Уникальный идентификатор проекта RFMEFI62117X0015).

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Читайте также: