Результаты испытаний препарата «Амплисенс HСV монитор

Обновлено: 24.09.2022

Авторы: Волкова Р.А., Эльберт Е.В., Петухов В.Г., Шалунова Н.В., Зайцев В.С., Богословская Е.В. Башкирова Л.Ю., Цыганова Г.М. Шипулин Г.А.
Источник: ФГУН Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора, Москва; ФГУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва

Проведены медицинские испытания тест-системы для количественного определения РНК вируса гепатита С методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени», разработанной ФГУН Центральным НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. В качестве препарата сравнения использовали тест-систему для количественного определения РНК вируса гепатита С «АмплиСенс HCV Монитор» с гибридизационно-ферментной детекцией производства ФГУН ЦНИИЭ.

Контрольная группа была представлена образцами плазмы крови доноров с отрицательными результатами ИФА на наличие антител аHCV и отрицательными результатами ПЦР на наличие РНК HCV в тест-системе"АмплиСенс HCV" - 15 образцов.

Линейный диапазон определяемых величин препарата оценивали, используя ОСО РНК HСV (исходная концентрация и его разведения). Определение проводили дважды двумя операторами. Для построения графиков рассчитывали среднее количество РНК в пробах с повторными постановками. Построение графиков зависимости результата анализа (lg МЕ/мл) от lg разведения образца и расчет уравнения линии регрессии проводили с помощью программы Exel. Полученные результаты свидетельствуют о наличии линейной зависимости результата анализа от содержания РНК HСV в диапазоне от 5х102 до 5х107 МЕ/мл.

Специфичность тест-системы подтвердили путем тестирования образцов плазмы крови доноров. Всего было исследовано 15 образцов плазмы донорской крови. Во всех 15 образцах получены отрицательные результаты: пороговое значение флуоресценции (Ct) исследуемых образцов не определяется, соответствующее Ct отрицательного контрольного образца К- также не определяется, Сt для ВКО < 28. Специфичность тест-системы - 100 %.

Согласно международному консенсусу 2002 года эффективность противовирусной терапии оценивают по достоверному снижению вирусной нагрузки не менее чем на 2 lg через три месяца противовирусной терапии. С целью изучения возможности определения снижения вирусной нагрузки проведено исследование клинических образцов от 10 пациентов. Вирусную нагрузку определяли в образцах, полученных от пациентов до начала противовирусной терапии и через 3 месяца после начала лечения. У 8 из 10 пациентов вирусная нагрузка снизилась более чем на 2 lg. У двух пациентов наблюдалось снижение вирусной нагрузки на 1,2 lg и 0,25 lg.

Таким образом, установлены следующие характеристики тест-системы: линейный диапазон находится в пределах от 500 до 50 000 000 МЕ/мл; специфичность препарата – 100 %, коэффициент вариации при исследовании образцов с концентрацией, близкой к детекционному порогу, составил 40 %. Результаты, полученные испытуемой и референтной тест-системами различаются не более, чем на 0,5 lg в 95 % случаев, коэффициент корреляции –0,87. Результаты испытаний позволили рекомендовать тест-систему к регистрации.

Бесприборные ИФА тест-системы для дифференциации гепатитов А, В, С


Дробченко С.Н., Кальво А, Сэмюэльс Ф. Бесприборные ИФА тест-системы для дифференциации гепатитов А, В и С. Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: Материалы четвертой международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера.- Санкт-Петербург, 2008. - С. 38.

БЕСПРИБОРНЫЕ ИФА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ГЕПАТИТОВ А, В, С

Дробченко С.Н., Кальво А., Сэмюэльс Ф.

При подозрении на вирусный гепатит на первом этапе лечащему врачу необходимо исключить острые вирусные гепатиты А, В, С. В случае подтверждения вирусного гепатита следующим этапом является определение соотношения маркеров вирусного гепатита с целью выявления стадии заболевания.

Для точной диагностики вирусных гепатитов крайне важно наиболее полное определение всего спектра серологических маркеров. Достижения в области молекулярной биологии, биотехнологии в последнее десятилетие ХХ века позволили создать новое поколение иммуноферментных бесприборных тест-систем ИммуноКомб, что значительно расширило возможности в диагностике вирусных гепатитов.

ИммуноКомб позволяет определить вид вирусного гепатита, перенес ли пациент гепатит в прошлом, силу иммунитета после перенесенной инфекции, есть ли инфекция в настоящее время, стадию гепатита, была ли сделана прививка против гепатита, силу прививочного иммунитета.

Типовой набор реагентов ИммуноКомб позволяет проводить анализ по единому плану, варьируя количество исследуемого образца, длительность и температуру инкубации в зависимости от типа набора. Единая схема проведения анализа для всех тест-систем ИммуноКомб упрощает процесс подготовки персонала и позволяет избежать ошибок.

С целью увеличения порога чувствительности и сохранения высокой специфичности для конкретного теста разработчиками применялась наиболее подходящая модификация ИФА. В ИммуноКомб II HВs Ag 90’ использован «сандвич»-вариант ИФА; метод двойного распознавания применен в ИммуноКомб анти-HBsAg , в ИммуноКомб HAV IgM, ИммуноКомб HAV Ab; в ИммуноКомб HBc IgM, заложен принцип иммунного захвата ИФА. Непрямой метод ИФА выбран для ИммуноКомб HCV, ИммуноКомб HBc IgG.

Для дифференциации острого гепатита А и острых гепатитов В и С и выявления ранней стадии заболевания требуется минимальное комплексное обследование больных с помощью тест-систем ИммуноКомб на определение серологических маркеров: anti-HAV IgM, HВs Ag, anti-HВc IgM, anti-HCV. В случае положительного результата на наличие IgM-антител к HAV, уже на первом этапе диагностики можно поставить диагноз вирусного гепатита А. Их обязательное присутствие при всех случаях гепатита А определяет правомерность обозначения IgM антител как «золотого маркера» лабораторной диагностики гепатита А. Результаты ИммуноКомб HAV IgM подтверждают диагноз «гепатит А».

Выявление IgM-антител к HBc указывает на острую фазу вирусного гепатита В, при этом HBs Ag может не определяться на самых ранних стадиях заболевания, т.к. его концентрация в крови незначительна. Определение HBs Ag и IgG-антител к HBc подтверждает хроническую фазу ВГВ. HBc IgG является единственным маркером во время, так называемого, серологического окна острого гепатита В - периода после исчезновения специфических IgM и до образования анти-HBs. Выявление антител к поверхностному антигену вируса гепатита В свидетельствует о развитии иммунитета к вирусу гепатита В.

В тест-системе ИммуноКомб HCV на разные точки одного зубца гребня нанесены высокоочищенные антигены HCV: отдельно core и неструктурные NS3, NS4, NS5. Благодаря этому решению ИммуноКомб HCV позволяет определять ранние анти-NS3, NS4, NS5 антитела так же хорошо, как и анти-коровые антитела, которые вынесены на отдельную точку на гребне, что играет значительную роль в правильном обнаружении ранней стадии гепатита С.

Дифференцированное выявление антител к структурным и неструктурным антигенам вируса гепатита С позволяет прогнозировать течение заболевания и определять более раннюю стадию заболевания. Обнаружение антител только к core-антигену свидетельствует об острой фазе заболевания. При хронизации процесса обнаруживаются антитела как к core-антигену, так и к неструктурным белкам.

Проведенные ВОЗ сравнительные испытания 10 быстрых простых тестов на HBsAg (Determine HBsAg, DoubleCheck HBs Antigen, ImmunoComb (ИммуноКомб) II HBs Ag 90’, Serodia-HBs.PA, Genelabs Diagnostics Rapid HBsAg, Hepacard, Advanced Quality One Step HBsAg Test, Uni-Gold HBsAg, Genedia HBsAg, Hep B Stat-Pack) показали, что чувствительность и специфичность этих тестов не уступает характеристикам ELISA тестов на HBsAg. ИммуноКомб II HBs Ag 90’ определял HBsAg на более ранних стадиях и в более низких концентрациях, чем другие тесты, участвовавшие в испытаниях. ИммуноКомб II HBs Ag 90’ выявлял антиген в образцах сероконверсионной панели в среднем на 1 сутки раньше, чем референс-тест Monolisa Ag HBs Plus. Все остальные тесты обнаруживали HBsAg, отставая от референс-теста, по крайней мере, на двое суток. Количество образцов низкотитражной панели, идентифицированных тестом ИммуноКомб, как содержащие HBsAg, совпадало с количеством образцов, выявленных референс-тестом Hepanostika HBsAg.

Проведенные во Франции международные испытания показали, что чувствительность и специфичность ИммуноКомб II HCV соответствует уровню наиболее высокочувствительных тестов Abbot, Ortho и составляет 100% и 99,5% соответственно. При исследовании сероконверсионных панелей было показано, что БПТ ИммуноКомб первым выявлял образцы более ранних стадий сероконверсий, превосходя показатели референс-теста (Био-Рад).

Современный период борьбы с вирусными гепатитами характеризуется началом массового применения вакцин против гепатитов В и А. При этом необходимо осуществлять как пред, так и пост-вакцинальный скрининг. ИммуноКомб HAV Ab и ИммуноКомб аnti-HВs позволяют количественно оценивать уровень антител в крови оперативно решать вопросы о необходимости вакцинации и ее результативности.

В Российской Федерации ИФА ИммуноКомб разрешены и успешно используется для скрининга и обследования доноров с 1992 года. Типовой набор реагентов ИммуноКомб (от 1 до 36 тестов) позволяет проводить анализ по единому плану, варьируя количество исследуемого образца и продолжительность инкубации в зависимости от типа тест-системы. Возможен как визуальный, так и автоматизированный учет количественных результатов. Такой унифицированный подход к диагностике вирусных гепатитов намного упрощает подготовку персонала и работу лаборатории в целом.

ИФА ИммуноКомб сертифицированы СЕ и широко используются более чем в ста странах мира. Как достоверные, высокочувствительные и специфичные тесты ИммуноКомб отобраны для программ ВОЗ, UNAIDS, Красного Креста. Минздравсоцразвития рекомендует ИФА БПТ ИммуноКомб для обследования доноров крови, органов и тканей человека, скрининговых исследований; для подтверждения результатов скрининговых исследований (приказ № 292 от 30.07.2001г., № 322 от 21.10.2002г., № 336 от 07.09.2000г.).

Тест-система iSCREEN-Hep для выявления вируса гепатита С в сыворотке, плазме и цельной крови (40 тестов/уп.)

Экспресс тест на гепатит C (HCV) - это иммунохроматографический тест содержащий коллоидное золото, для качественного определения антител к гепатиту С (НСV) в цельной крови, сыворотке и плазме человека. Данный тест является скрининговым, поэтому все положительные результаты тестирования должны быть подтверждены альтернативными методами, такими как western blot. Экспресс тест на гепатит C (HCV) основан на методе хроматографии и позволяет получить результат в течение 15 минут.

Тестирование начинается с добавления образца в лунку для образца (S), после чего немедленно следует добавить растворитель образца в лунку для растворителя (D). Коньюгат HCV антигена с коллоидным золотом, иммобилизованный на подушечке для образца, реагирует с HCV антителами, присутствующими в образце крови, сыворотки или плазмы, образуя комплекс коньюгат /HCV антитело. Поскольку смесь мигрирует вдоль тест - полоски, комплекс коньюгат /HCV антитело захватывается антитело - связанным протеином А, иммобилизованным на мембране, и формирует окрашенную полосу в тестовой зоне. Отрицательные образцы не формируют тестовой полосы в виду отсутствия комплекса коньюгата коллоидного золота с HCV антителом. Антигены, использующиеся в тесте – это рекомбинантные протеины, соответствующие высоко иммунореактивным фрагментам вируса гепатита С. В конце тестирования, независимо от его результата, в контрольной зоне появляется окрашенная контрольная полоса. Эта окрашенная полоса является результатом связывания коньюгата коллоидного золота с анти - HCV антителом, иммобилизованным на мембране. Контрольная полоса подтверждает функциональную исправность коньюгата коллоидного золота и правильности проведения тестирования.

1. Сбор образцов цельной крови, сыворотки и плазмы производится в соответствии со стандартными лабораторными процедурами.

2. Хранение: Если образец не был использован в день сбора, его следует хранить в холодильнике. 0.1% натрия азид может быть добавлен в образцы в качестве консерванта, это не повлияет на результат тестирования. Если образцы не были протестированы в течение 3-х дней, их следует заморозить. Избегайте процедур заморозки - разморозки образцов, повторяющихся более 2-3х раз.

2. Достать тест-кассету иммунохроматографического теста из упаковки и положить на чистую сухую поверхность.

3. С помощью пластиковой пипетки добавьте 1 каплю (10 μl) образца цельной крови, сыворотки или плазмы в круглую лунку для образца (S) на тест – кассете.

4. Сразу же после добавления образца, добавьте 2 капли растворителя образца в лунку для растворителя (D).

2. Положительный: В дополнение к контрольной полосе, в тестовой зоне также появилась окрашенная тестовая полоса.

3. Недействительный: Нет ни в тестовой, ни в контрольной зонах пурпурно-красных полос, или полоса есть только в тестовой зоне. Тестирование считается недействительным и должно быть повторено с использованием нового иммунохроматографического теста.

В России запустили производство первых в мире комбинированных тестов 4 в 1 на ВИЧ, гепатиты и сифилис

В России запустили производство первых в мире комбинированных тестов 4 в 1 на ВИЧ, гепатиты и сифилис

Российская биотехнологическая компания «Биопалитра» запустила в ОЭЗ «Санкт-Петербург» серийное производство тест-системы 4 в 1 «МультиСКРИН» для диагностики ВИЧ, гепатитов В и С, сифилиса. Это первый в мире комбинированный тест, который одновременно выявляет сразу четыре заболевания.

«МультиСКРИН» – запатентованная планшетная тест-система, которая за один анализ позволяет выявить наличие маркеров ВИЧ-инфекции, гепатита В и С, сифилиса. Так называемая «госпитальная четверка» – один из самых востребованных в мире комплексов анализов, необходимых при госпитализации, в службе крови и во многих других ситуациях.

По данным компании, сейчас в мире нет подобных тест-систем, которые на молекулярном уровне могут диагностировать четыре инфекции в одном анализе. Это полностью отечественная разработка.

Одна планшетная система «МультиСКРИН» включает компоненты на 96 тестов. Плановая мощность запущенного производства составит 60 тысяч планшетов или 5,76 млн тестов в год. Первую опытную. партию продукции компания направила в федеральную сеть клинико-диагностических лабораторий «Ситилаб». Среди других будущих клиентов: крупные государственные и частные клиники, станции переливания крови, диагностические центры.

Работа новой тест-системы основана на знакомой лабораториям методике иммуноферментного анализа (ИФА). Применение комбинированной системы в три раза снижает расходы на реагенты и трудозатраты лаборатории. При этом результат исследования становится известен через 1 час 55 минут, что в три раза быстрее, чем отдельная диагностика по каждой инфекции. Снижение времени ожидания результата играет критически важное значение при госпитализации пациентов.

Появление дополнительных возможностей быстрого выявления социально значимых заболеваний и повышение их доступности соответствует национальным проектам и целям в области здравоохранения. Раннее определение болезни может снизить уровень смертности и соответственно повысить продолжительность жизни в России.

«Биопалитра» рассчитывает, что новый тест откроет перспективный рынок комбинированных и мультиплексных систем. Благодаря «МультиСКРИН» компания планирует получить долю в сегменте массового скрининга, где на сегодняшний день господствуют тест-системы, требующие раздельного проведения анализов.

«МультиСКРИН» прошел клинические испытания на базе новосибирского НИИ «Вектор» Роспотребнадзора и уже получил регистрационное удостоверение. Кроме того, разработка прошла дополнительные тестирования на базе московского НИИ скорой помощи им. Склифосовского. Исследование подтвердило специфичность на уровне более 99% и чувствительность – 100%.

В конце 2021 года «Биопалитра» намерена открыть дополнительную производственную площадку. Благодаря этому компания увеличит выпуск «МультиСКРИНов» до 240 тысяч планшетов или 23 млн тестов в год.

«МультиСКРИН» целиком отечественная разработка. Ее создатели – последователи новосибирской научной школы. Главный разработчик продукта Николай Максимов окончил аспирантуру ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» в наукограде Кольцово Новосибирской области. Разработка тест-системы велась под научным руководством выходца из «Вектора», доктора медицинских наук Георгия Игнатьева. Ныне, он является заведующий отделом общей вирусологии, заместителем руководителя направления по качеству и инновационным разработкам Федерального научного центра исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. Чумакова в Москве.

Вирусные гепатиты

Набор реагентов основан на принципе непрямого иммуноферментного анализа и предназначен для первичного скрининга образцов сыворотки или плазмы крови человека на присутствие антител к вирусу гепатита С. Основным компонентом набора является смесь очищенных рекомбинантных полипептидов - аналогов Core-белка и комбинации фрагментов неструктурных белков NS3, NS4, NS5 разных субтипов вируса гепатита С, сорбированных на поверхности лунок полистироловых планшетов.

E-0211
Блот-ВГС

Набор реагентов "Блот-ВГС" предназначен для подтверждающего анализа образцов сыворотки или плазмы крови человека на присутствие антител к отдельным антигенам вируса гепатита С методом лайн-блота.
Основным компонентом набора реагентов является иммуносорбент, представляющий собой стрипы из нитроцеллюлозной мембраны, на которых в виде отдельных полос иммобилизованы рекомбинантные полипептиды - аналоги антигенов ВГС ("Core", "NS3", "NS4" и "NS5") и контрольные антигены.

Инструкция по запросу.

E-0356
Гепаскан HBsAg (комплект А)

Набор реагентов для выявления HBs-антигена в сыворотке/плазме крови человека c использованием рекомбинантного антигена и моноклональных антител
(ФСР 2008/03732)

Комплект А набора реагентов «Гепаскан HBsAg» предназначен для выявления HBs-антигена в сыворотке или плазме крови человека методом
иммуноферментного анализа.
Чувствительность определения HBs-антигена составляет 0,1 МЕ/мл.

Исследования образцов в данном наборе реагентов проводятся одностадийным иммуноферментным «сандвич» - методом.
Для проведения анализа используются образцы сыворотки или плазмы крови человека в объеме не менее 100 мкл.

E-0355
Гепаскан HBsAg (комплект В)

Набор реагентов предназначен для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBs-антиген) ad и ау субтипов в сыворотке или плазме крови доноров и для дифференциальной диагностики вирусных гепатитов путем одностадийного иммуноферментного "сандвич"-метода. В тест-системе "Гепаскан HBsAg" используются мышиные моноклональные антитела к различным центрам связывания HBs-антигена, одни из которых адсорбированы на твердой фазе, а другие конъюгированы с пероксидазой хрена.

E-0383
Гепаскан HВsAg-подтверждающий тест

Набор реагентов для подтверждения содержания HBs-антигена в сыворотке/плазме крови человека
(ФСР 2008/03732)

Набор реагентов «Гепаскан HBsAg-подтверждающий тест» предназначен для подтверждения содержания HBs-антигена в образцах сыворотки или плазмы крови человека. Тест основан на способности специфических антител нейтрализовать присутствующий в исследуемых пробах HBsAg. Образцы, выявленные при исследовании набором реагентов «Гепаскан HBsAg» как положительные, следует проверять набором «Гепаскан HBsAg-подтверждающий тест» для установления специфичности определения.

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Читайте также: